ClickCease
+ 1-915-850-0900 spinedoctors@gmail.com
പേജ് തിരഞ്ഞെടുക്കുക

സുൽഫോപ്രഫെയ്ൻ ബ്രോക്കോളി, കാബേജ്, കോളിഫ്ലവർ, ബ്രസ്സൽസ് മുളകൾ തുടങ്ങിയ ക്രൂസിഫറസ് പച്ചക്കറികളിൽ കാണപ്പെടുന്ന ഓർഗാനോസൾഫർ സംയുക്തങ്ങളുടെ ഐസോത്തിയോസയനേറ്റ് ഗ്രൂപ്പിലെ ഒരു പദാർത്ഥമാണ് ഫൈറ്റോകെമിക്കൽ. ബോക്‌ചോയ്, കാലെ, കോളർഡ്‌സ്, കടുക് പച്ചിലകൾ, വെള്ളച്ചാട്ടം എന്നിവയിലും ഇത് കാണാം. വിവിധ തരത്തിലുള്ള ക്യാൻസറുകൾ തടയാൻ സൾഫോറഫേൻ സഹായിക്കുമെന്ന് ഗവേഷണ പഠനങ്ങൾ തെളിയിച്ചിട്ടുണ്ട് Nrf2 ന്റെ ഉത്പാദനം സജീവമാക്കുന്നു, അല്ലെങ്കിൽ ന്യൂക്ലിയർ ഫാക്ടർ എറിത്രോയിഡ് 2-അനുബന്ധ ഘടകം, ഓക്‌സിഡന്റുകളോടുള്ള സെല്ലിന്റെ പ്രതികരണത്തെ നിയന്ത്രിക്കുന്ന സംരക്ഷിത ആന്റിഓക്‌സിഡന്റ് മെക്കാനിസങ്ങളെ നിയന്ത്രിക്കുന്ന ഒരു ട്രാൻസ്‌ക്രിപ്ഷൻ ഘടകം. ഇനിപ്പറയുന്ന ലേഖനത്തിന്റെ ഉദ്ദേശ്യം സൾഫോറാഫേനിന്റെ പ്രവർത്തനത്തെ വിവരിക്കുക എന്നതാണ്.

ഉള്ളടക്കം

വേര്പെട്ടുനില്ക്കുന്ന

KEAP1-Nrf2-ARE ആന്റിഓക്‌സിഡന്റ് സിസ്റ്റം കോശങ്ങൾ ഓക്‌സിഡേറ്റീവ്, സെനോബയോട്ടിക് സമ്മർദ്ദങ്ങളോട് പ്രതികരിക്കുന്നതിനുള്ള ഒരു പ്രധാന മാർഗമാണ്. ക്രൂസിഫറസ് പച്ചക്കറികളിൽ നിന്ന് ഉരുത്തിരിഞ്ഞ ഇലക്‌ട്രോഫിലിക് ഐസോത്തിയോസയനേറ്റായ സൾഫോറാഫെയ്ൻ (SFN) KEAP1-Nrf2-ARE പാതയെ സജീവമാക്കുകയും വിട്ടുമാറാത്ത ഓക്‌സിഡേറ്റീവ് സ്ട്രെസ് ഒരു പ്രധാന എറ്റിയോളജിക്കൽ പങ്ക് വഹിക്കുന്ന രോഗങ്ങളുടെ ചികിത്സയിൽ താൽപ്പര്യമുള്ള ഒരു തന്മാത്രയായി മാറുകയും ചെയ്യുന്നു. കൾച്ചർഡ്, ഹ്യൂമൻ റെറ്റിനൽ പിഗ്മെന്റ് എപ്പിത്തീലിയൽ (RPE-1) സെല്ലുകളുടെ മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയ, SFN ഉപയോഗിച്ച് ചികിത്സിക്കുന്ന ഹൈപ്പർഫ്യൂഷന് വിധേയമാകുന്നത് Nrf2, അതിന്റെ സൈറ്റോപ്ലാസ്മിക് ഇൻഹിബിറ്റർ KEAP1 എന്നിവയിൽ നിന്ന് സ്വതന്ത്രമാണ്. അപ്പോപ്‌ടോസിസ് സമയത്ത് മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയയിൽ സുഷിരങ്ങൾ രൂപപ്പെടുന്നത് തടയുന്നതിലൂടെ മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയൽ ഫ്യൂഷൻ സൈറ്റോപ്രൊട്ടക്റ്റീവ് ആണെന്ന് റിപ്പോർട്ടുചെയ്‌തു, ഇതിന് അനുസൃതമായി, ഞങ്ങൾ Nrf2-സ്വതന്ത്ര, അപ്പോപ്റ്റോസിസ്-ഇൻഡ്യൂസർ, സ്‌റ്റോറോസ്‌പോരിൻ എന്നിവയ്‌ക്ക് വിധേയമാകുന്ന SFN- ചികിത്സിച്ച കോശങ്ങളുടെ സൈറ്റോപ്രൊട്ടക്ഷൻ കാണിക്കുന്നു. യാന്ത്രികമായി, SFN ലയിക്കുന്ന വിഘടന ഘടകമായ Drp1 മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയയിലേക്കും പെറോക്‌സിസോമുകളിലേക്കും റിക്രൂട്ട്‌മെന്റ് കൂടാതെ/അല്ലെങ്കിൽ നിലനിർത്തുന്നത് ലഘൂകരിക്കുന്നു, പക്ഷേ മൊത്തത്തിലുള്ള Drp1 സമൃദ്ധിയെ ബാധിക്കില്ല. SFN-ന്റെ പ്രയോജനകരമായ ഗുണങ്ങൾ KEAP1-Nrf2-ARE സിസ്റ്റം സജീവമാക്കുന്നതിനും അപ്പുറത്തേക്ക് വ്യാപിക്കുന്നുവെന്ന് ഈ ഡാറ്റ തെളിയിക്കുന്നു, കൂടാതെ ഒന്നിലധികം ക്ലിനിക്കൽ ട്രയലുകളിൽ ഈ ഏജന്റിന്റെ നിലവിലെ ഉപയോഗം കണക്കിലെടുത്ത് കൂടുതൽ ചോദ്യം ചെയ്യേണ്ടതുണ്ട്.

അടയാളവാക്കുകൾ: സൾഫോറഫെയ്ൻ, Nrf2, Drp1, മൈറ്റോകോൺഡ്രിയ, വിഘടനം, ഫ്യൂഷൻ, അപ്പോപ്റ്റോസിസ്

അവതാരിക

മൈറ്റോകോൺഡ്രിയൽ വിഘടനത്തിന്റെ Nrf2-സ്വതന്ത്ര ഇൻഹിബിറ്ററാണ് സൾഫോറഫേൻ

സൾഫോറഫെയ്ൻ (SFN) എന്നത് ക്രൂസിഫറസ് പച്ചക്കറികളിൽ നിന്ന് സാധാരണയായി ലഭിക്കുന്ന ഒരു ഐസോത്തിയോസയനേറ്റ് സംയുക്തമാണ് [56]. കേടായ കോശങ്ങളിൽ നിന്ന് ഹൈഡ്രോലൈറ്റിക് എൻസൈം മൈറോസിനേസിന്റെ വെസിക്കുലാർ റിലീസ് വഴി വേട്ടയാടലിനുള്ള സെനോബയോട്ടിക് പ്രതികരണമായി ഇത് സസ്യങ്ങളിൽ സൃഷ്ടിക്കപ്പെടുന്നു; ഈ എൻസൈം ഗ്ലൂക്കോസിനോലേറ്റുകളെ ഐസോത്തിയോസൈന്റുകളാക്കി മാറ്റുന്നു [42]. കഴിഞ്ഞ രണ്ട് പതിറ്റാണ്ടുകളായി, SFN അതിന്റെ റിപ്പോർട്ട് ചെയ്യപ്പെട്ട ആന്റികാൻസർ, ആന്റിഓക്‌സിഡന്റ്, ആന്റിമൈക്രോബയൽ പ്രോപ്പർട്ടികൾ [57] എന്നിവയാൽ വിപുലമായി വിശേഷിപ്പിക്കപ്പെടുന്നു. ഈ ഫലപ്രാപ്തിയുടെ ഭൂരിഭാഗവും KEAP1-Nrf2-ആൻറിഓക്‌സിഡന്റ് റെസ്‌പോൺസ് എലമെന്റ് (ARE) സിഗ്നലിംഗ് പാത്ത്‌വേ മോഡുലേറ്റ് ചെയ്യാനുള്ള SFN-ന്റെ ശേഷിയാണ്, എന്നിരുന്നാലും സംയുക്തത്തിന്റെ അധിക പ്രവർത്തനങ്ങൾ തിരിച്ചറിഞ്ഞിട്ടുണ്ട്, ഹിസ്റ്റോൺ ഡീസെറ്റിലേസ് പ്രവർത്തനത്തെ തടയുന്നതും സെൽ സൈക്കിൾ പുരോഗതിയും [ 29]. Nrf2 മാസ്റ്റർ ആന്റിഓക്‌സിഡന്റ് ട്രാൻസ്‌ക്രിപ്ഷൻ ഘടകമാണ്, ഹോമിയോസ്റ്റാസിസിന്റെ അവസ്ഥയിൽ, സൈറ്റോപ്ലാസ്മിക് Cullin3KEAP1 ubiquitin ligase complex [20] ന്റെ പ്രവർത്തനത്തിലൂടെ അതിന്റെ സ്ഥിരത അടിച്ചമർത്തപ്പെടുന്നു. പ്രത്യേകമായി, ഡൈമെറിക് സബ്‌സ്‌ട്രേറ്റ് അഡാപ്റ്ററായ KEAP2-ലേക്ക് ബൈൻഡുചെയ്യുന്നതിലൂടെ Nrf3 Cullin1KEAP1 ലിഗേസിലേക്ക് റിക്രൂട്ട് ചെയ്യപ്പെടുന്നു, തുടർന്ന് പ്രോട്ടീസോം-മെഡിയേറ്റഡ് ഡിഗ്രേഡേഷനായി ട്രാൻസ്‌ക്രിപ്ഷൻ ഫാക്‌ടറിനെ ലക്ഷ്യമിടുന്ന പോളിയുബ് ശൃംഖലകൾ ഉപയോഗിച്ച് പരിഷ്‌ക്കരിക്കുന്നു. ഈ ഘടനാപരമായ വിറ്റുവരവ് സമ്മർദ്ദമില്ലാത്ത സെല്ലുകളിലെ Nrf2 ന്റെ അർദ്ധായുസ്സ് ~15 മിനിറ്റ് [30], [33], [46], [55] ആയി പരിമിതപ്പെടുത്തുന്നു. പലതരത്തിലുള്ള സമ്മർദ്ദങ്ങളോടുള്ള പ്രതികരണമായി, പ്രത്യേകിച്ച് ഓക്സിഡേറ്റീവ് സ്ട്രെസ്, KEAP1, സിസ്റ്റൈൻ സമ്പുഷ്ടമായ പ്രോട്ടീൻ, ഒരു റെഡോക്സ് സെൻസറായി പ്രവർത്തിക്കുന്നു, കൂടാതെ CUL151-ൽ നിന്ന് Nrf1-KEAP2-നെ KEAP1 വിഘടിപ്പിക്കുന്നു, പ്രത്യേകിച്ച് C3 എന്ന ക്രിട്ടിക്കൽ സിസ്റ്റൈനുകളുടെ ഓക്സിഡേറ്റീവ് പരിഷ്ക്കരണം. 2], [8], [20]. ശ്രദ്ധേയമായി, SFN, കൂടാതെ മറ്റ് Nrf55 ആക്റ്റിവേറ്ററുകൾ, KEAP2 ന്റെ C151 പരിഷ്കരിച്ചുകൊണ്ട് ഓക്സിഡേറ്റീവ് സ്ട്രെസ് അനുകരിക്കുന്നു ഉദാ [1]. Nrf21-ന്റെ സ്ഥിരത, ന്യൂക്ലിയസിലേക്ക് മാറ്റാൻ അനുവദിക്കുന്നു, അവിടെ അത് രണ്ടാം ഘട്ട ആന്റിഓക്‌സിഡന്റുകളുടെയും ഡിടോക്‌സിഫിക്കേഷൻ ജീനുകളുടെയും ബാറ്ററിയുടെ പ്രകടനത്തെ പ്രേരിപ്പിക്കുന്നു. Nrf2 ചെറിയ മാഫ് പ്രോട്ടീനുകളുമായുള്ള ഹെറ്ററോഡൈമറൈസേഷനിലൂടെ അതിന്റെ കോഗ്നേറ്റ് ടാർഗെറ്റ് ജീനുകളുടെ ആന്റിഓക്‌സിഡന്റ് റെസ്‌പോൺസ് പ്രൊമോട്ടർ ഘടകങ്ങളുമായി (ARE) ബന്ധിപ്പിക്കുന്നു [2]. ഈ സംവിധാനം SFN പോലെയുള്ള പരോക്ഷ ആന്റിഓക്‌സിഡന്റുകളോടും മൈറ്റോകോൺഡ്രിയ [19] ഉൽപാദിപ്പിക്കുന്ന ഫ്രീ റാഡിക്കലുകളോടും അല്ലെങ്കിൽ ഓക്‌സിഡേറ്റീവ് സ്ട്രെസിന്റെ മറ്റ് ശാരീരിക സ്രോതസ്സുകളോടും ചലനാത്മകവും സെൻസിറ്റീവായതുമായ പ്രതികരണം അവതരിപ്പിക്കുന്നു [16].

എടിപി ഉൽപ്പാദനം, ഇൻട്രാ സെല്ലുലാർ കാൽസ്യം ബഫറിംഗ് മുതൽ റെഡോക്സ് റെഗുലേഷൻ, അപ്പോപ്റ്റോസിസ് [13], [49] വരെയുള്ള സെല്ലുലാർ പ്രവർത്തനങ്ങളുടെ ഒരു ഹോസ്റ്റ് നിയന്ത്രിക്കുന്ന ഡൈനാമിക്, സബ്സെല്ലുലാർ അവയവങ്ങളാണ് മൈറ്റോകോൺഡ്രിയ. കോശത്തിനുള്ളിലെ റിയാക്ടീവ് ഓക്സിജൻ സ്പീഷീസുകളുടെ (ROS) പ്രധാന സ്രോതസ്സും മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയയെ പ്രതിനിധീകരിക്കുന്നു. അതിനാൽ, സെല്ലുലാർ ആവശ്യങ്ങൾ നിറവേറ്റുന്നതിനായി എടിപി ഉൽപ്പാദനം ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്യുന്നതിന് മൈറ്റോകോൺഡ്രിയൽ പ്രവർത്തനത്തിന്റെ ശരിയായ നിയന്ത്രണം ആവശ്യമാണ്, അതേസമയം അമിതമായ ഫ്രീ റാഡിക്കൽ ഉൽപാദനത്തിന്റെ ദോഷകരമായ പ്രത്യാഘാതങ്ങൾ കുറയ്ക്കുന്നു. മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയൽ ഫംഗ്‌ഷന്റെ മികച്ച മോഡുലേഷനുള്ള ഒരു നിർണായക ആവശ്യകത, ബയോകെമിക്കൽ മെഷീനുകളായി സ്വതന്ത്രമായി പ്രവർത്തിക്കാനുള്ള മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയയ്‌ക്കുള്ള കഴിവാണ്, കൂടാതെ ഒരു വലിയ, പ്രതികരിക്കുന്ന ശൃംഖലയുടെ ഭാഗമായി.

മൈറ്റോകോൺഡ്രിയൽ നെറ്റ്‌വർക്ക് രൂപഘടനയും പ്രവർത്തനവും നിർണ്ണയിക്കുന്നത് ഫിഷനും ഫ്യൂഷനും തമ്മിലുള്ള നിയന്ത്രിത ബാലൻസാണ്. കോശവിഭജന സമയത്ത് മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയയുടെ മകൾ സെൽ പാരമ്പര്യത്തിനും [28] അതുപോലെ മൈറ്റോഫാഗി [1] എന്ന് വിളിക്കപ്പെടുന്ന ഡിപോളറൈസ്ഡ് അല്ലെങ്കിൽ കേടുപാടുകൾ സംഭവിച്ച മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയയുടെ സെലക്ടീവ്, ഓട്ടോഫാജിക് ഡിഗ്രേഡേഷനും മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയൽ ഫിഷൻ ആവശ്യമാണ്. നേരെമറിച്ച്, മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയൽ ജീനോമുകളുടെ പൂർത്തീകരണത്തിനും അയൽവാസിയായ മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയയ്‌ക്കിടയിലുള്ള ഇലക്‌ട്രോൺ ഗതാഗത ശൃംഖല ഘടകങ്ങൾ പങ്കിടുന്നതിനും ഫ്യൂഷൻ ആവശ്യമാണ് [54]. തന്മാത്രാ തലത്തിൽ, മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയൽ വിഘടനവും സംയോജനവും നിയന്ത്രിക്കുന്നത് വലിയ ഡൈനാമിൻ പോലുള്ള GTPases ആണ്. മൂന്ന് എൻസൈമുകൾ പ്രാഥമികമായി സംയോജനത്തെ നിയന്ത്രിക്കുന്നു: മൈറ്റോഫുസിൻസ് 1 ഉം 2 ഉം (Mfn1/2) രണ്ട്-പാസ് ഔട്ടർ മെംബ്രൻ പ്രോട്ടീനുകളാണ്, അത് അടുത്തുള്ള മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയ [15], [25], [37] തമ്മിലുള്ള ഹെറ്ററോടൈപിക് ഇടപെടലുകൾ വഴി ബാഹ്യ മെംബ്രൺ സംയോജനത്തിന് മധ്യസ്ഥത വഹിക്കുന്നു, അതേസമയം OPA1 ഒരു ആന്തരികമാണ്. മെംബ്രൻ പ്രോട്ടീൻ, ആന്തരിക സ്തരങ്ങളുടെ മെൽഡിംഗ് നിയന്ത്രിക്കുന്നതിലൂടെ ഒരേസമയം മാട്രിക്സ് കണക്റ്റിവിറ്റി ഉറപ്പാക്കുന്നു [5]. മൂന്ന് പ്രോട്ടീനുകളുടെയും GTPase പ്രവർത്തനം ശക്തമായ സംയോജനത്തിന് ആവശ്യമാണ് [5], [18], കൂടാതെ OMA1 [1], PARL [14], YME6L [1] എന്നീ പ്രോട്ടീസുകളാൽ മൈറ്റോകോൺഡ്രിയൽ ആന്തരിക സ്തരത്തിനുള്ളിലെ സങ്കീർണ്ണമായ പ്രോട്ടിയോളിസിസ് വഴി OPA45 നിയന്ത്രിക്കപ്പെടുന്നു. ]. പ്രധാനമായും, കേടായതും ആരോഗ്യകരവുമായ മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയയുടെ സംയോജനത്തെ അടിച്ചമർത്തുന്നതിന് കാര്യക്ഷമമായ സംയോജനത്തിന് കേടുകൂടാത്ത മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയൽ മെംബ്രൺ പൊട്ടൻഷ്യൽ ആവശ്യമാണ് [26].

ഡൈനാമിൻ-റിലേറ്റഡ് പ്രോട്ടീൻ 1 (Drp1/DNM1L) എന്ന സൈറ്റോസോളിക് പ്രോട്ടീനാണ് മൈറ്റോകോൺഡ്രിയൽ ഫിഷൻ പ്രാഥമികമായി ഉത്തേജിപ്പിക്കുന്നത്. Drp1 സൈറ്റോസോളിൽ നിന്ന് മൈറ്റോകോൺഡ്രിയൽ പുറം മെംബ്രണിലെ വിഘടനത്തിന്റെ സാധ്യതയുള്ള സ്ഥലങ്ങളിലേക്ക് റിക്രൂട്ട് ചെയ്യപ്പെടുന്നു [43]. ബാഹ്യ സ്തരത്തിലെ Drp1-ന്റെ പ്രധാന റിസപ്റ്ററുകൾ മൈറ്റോകോൺഡ്രിയൽ ഫിഷൻ ഫാക്ടർ (Mff) [32] കൂടാതെ, ഒരു പരിധിവരെ, ഫിഷൻ 1 (Fis1) [51] എന്നിവയാണ്. കൂടാതെ, വിഘടന സാധ്യതയുള്ള സ്ഥലങ്ങളിൽ Drp1 പ്രോട്ടീന്റെ പ്രവർത്തനത്തെ കൂടുതൽ പരിമിതപ്പെടുത്താൻ പ്രവർത്തിക്കുന്ന MIEF51/MiD1 എന്ന ഡെക്കോയ് റിസപ്റ്റർ കണ്ടെത്തി [58]. മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയൽ ബാഹ്യ സ്തരത്തിൽ ഡോക്ക് ചെയ്‌തുകഴിഞ്ഞാൽ, Drp1 മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയന്റെ ശരീരത്തിന് ചുറ്റുമുള്ള സർപ്പിളാകൃതിയിലുള്ള ഘടനകളിലേക്ക് ഒലിഗോമറൈസ് ചെയ്യുന്നു, തുടർന്ന് മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയൽ പുറം, അകത്തെ സ്‌തരങ്ങളുടെ ശാരീരിക ഛേദം മധ്യസ്ഥമാക്കാൻ GTP ജലവിശ്ലേഷണത്തിൽ നിന്ന് ലഭിക്കുന്ന ഊർജ്ജം ഉപയോഗിക്കുന്നു [17]. എൻഡോപ്ലാസ്മിക് റെറ്റിക്യുലം-ഡൈരൈവ്ഡ് ട്യൂബ്യൂളുകൾ Drp1 ഒലിഗോമറൈസേഷനു മുമ്പുള്ള മൈറ്റോകോൺഡ്രിയയുടെ ഒരു പ്രാരംഭ കൺസ്ട്രക്റ്ററായി പ്രവർത്തിക്കുന്നു, സങ്കുചിതമല്ലാത്ത മൈറ്റോകോൺഡ്രിയ ഒരു പൂർത്തിയായ Drp1 സർപ്പിളത്തിന്റെ അനുവദനീയമായ ചുറ്റളവിനേക്കാൾ വിശാലമാണെന്ന വെളിപ്പെടുത്തലിന് അടിവരയിടുന്നു [12]. മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയൽ വിഘടനത്തിന് മുമ്പുള്ള ഇആർ-മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയ ഇടപെടലുകൾക്കും ആക്റ്റിൻ ഡൈനാമിക്‌സ് പ്രധാനമാണ് [24]. മൈറ്റോകോൺഡ്രിയൽ വിഘടനത്തിൽ അതിന്റെ പങ്ക് കൂടാതെ, Drp1 പെറോക്സിസോമുകളുടെ വിഘടനത്തെ ഉത്തേജിപ്പിക്കുന്നു [40].

നന്നായി സ്വഭാവമുള്ള ഡൈനാമിൻ പ്രോട്ടീനുമായി Drp1 വളരെ സാമ്യമുള്ളതാണ്, അതിൽ രണ്ട് പ്രോട്ടീനുകളിലും N-ടെർമിനൽ GTPase ഡൊമെയ്‌ൻ, സെൽഫ്-ഒലിഗോമറൈസേഷന് നിർണായകമായ ഒരു മിഡിൽ ഡൊമെയ്‌ൻ, ഒരു C-ടെർമിനൽ GTPase എഫക്‌റ്റർ ഡൊമെയ്‌ൻ [31] എന്നിവ അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു. Drp1 അതിന്റെ റിസപ്റ്റർ പ്രോട്ടീനുകളായ Mff, Fis1 എന്നിവയുമായുള്ള ഇടപെടലിലൂടെയും Drp1 ന്റെ തനതായ B-ഇൻസേർട്ട് ഡൊമെയ്‌നിലൂടെ മൈറ്റോകോൺഡ്രിയ-നിർദ്ദിഷ്ട ഫോസ്‌ഫോളിപ്പിഡ് കാർഡിയോലിപിനുമായുള്ള അതിന്റെ ബന്ധത്തിലൂടെയും മൈറ്റോകോൺഡ്രിയൽ മെംബ്രണുകളുടെ സെലക്ടിവിറ്റി കൈവരിക്കുന്നു [2]. Drp1 സാധാരണയായി സൈറ്റോപ്ലാസത്തിൽ ഒരു ഹോമോട്രാമർ ആയി നിലവിലുണ്ട്, കൂടാതെ മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയൽ ഫിഷൻ സൈറ്റുകളിലെ ഉയർന്ന ക്രമത്തിലുള്ള അസംബ്ലി Drp1 [3] ന്റെ മിഡിൽ ഡൊമെയ്‌നിന്റെ മധ്യസ്ഥതയിലാണ്.

മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയൽ ഫംഗ്ഷനും KEAP1-Nrf2-ARE പാത്ത്‌വേയും തമ്മിലുള്ള അവ്യക്തമായ ബന്ധം കണക്കിലെടുത്ത്, മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയൽ ഘടനയിലും പ്രവർത്തനത്തിലും Nrf2 ആക്റ്റിവേഷന്റെ ഫലങ്ങൾ ഞങ്ങൾ അന്വേഷിച്ചു. അപ്രതീക്ഷിതമായി, Nrf2, KEAP1 എന്നിവയിൽ നിന്ന് സ്വതന്ത്രമായ മൈറ്റോകോൺഡ്രിയൽ ഹൈപ്പർഫ്യൂഷനെ SFN പ്രേരിപ്പിക്കുന്നുവെന്ന് ഞങ്ങൾ ഇവിടെ തെളിയിക്കുന്നു. SFN-ന്റെ ഈ പ്രഭാവം Drp1 ഫംഗ്‌ഷന്റെ ഒരു തടസ്സത്തിലൂടെയാണ്. Nrf2-സ്വതന്ത്രമായ അപ്പോപ്‌ടോസിസിനുള്ള പ്രതിരോധം SFN നൽകുന്നുവെന്നും Drp1-ന്റെ കുറവുള്ള കോശങ്ങളിൽ നിരീക്ഷിക്കപ്പെടുന്ന അനുകരണമാണെന്നും ഞങ്ങൾ കൂടുതൽ തെളിയിക്കുന്നു. Nrf2 സ്ഥിരപ്പെടുത്തുന്നതിനും സജീവമാക്കുന്നതിനും പുറമേ, SFN മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയൽ ഡൈനാമിക്‌സ് മോഡുലേറ്റ് ചെയ്യുകയും സെല്ലുലാർ ഫിറ്റ്‌നസും അതിജീവനവും സംരക്ഷിക്കുകയും ചെയ്യുന്നുവെന്ന് ഈ ഡാറ്റ കൂട്ടായി സൂചിപ്പിക്കുന്നു.

ഫലം

മൈറ്റോകോൺഡ്രിയയുടെ Nrf2/KEAP1-സ്വതന്ത്ര ഹൈപ്പർഫ്യൂഷൻ സൾഫോറഫേൻ പ്രേരിപ്പിക്കുന്നു

മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയൽ നെറ്റ്‌വർക്ക് ഡൈനാമിക്‌സിൽ Nrf2 ആക്റ്റിവേഷന്റെ ഫലങ്ങൾ പഠിക്കുന്നതിനിടയിൽ, Nrf1 സിഗ്നലിംഗിന്റെ ശക്തമായ ആക്‌റ്റിവേറ്ററായ സൾഫോറാഫേൻ (SFN) ഉപയോഗിച്ച് അനശ്വരമാക്കിയ, ഹ്യൂമൻ റെറ്റിനൽ പിഗ്മെന്റ് എപ്പിത്തീലിയൽ (RPE-2) കോശങ്ങളുടെ ചികിത്സ ശക്തമായ സംയോജനത്തിന് കാരണമാകുമെന്ന് ഞങ്ങൾ കണ്ടെത്തി. വാഹന-ചികിത്സ കൺട്രോൾ സെല്ലുകളുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ മൈറ്റോകോണ്ട്രിയൽ നെറ്റ്‌വർക്ക് (ചിത്രം 1A, B). ഈ കോശങ്ങളിലെ മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയയുടെ രൂപഘടന, പ്രധാന മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയൽ വിഘടന ഘടകമായ (ചിത്രം 1 എ) എൻ‌ഡോജെനസ് Drp1 ന്റെ സിആർ‌എൻ‌എ ക്ഷയിപ്പിച്ച കോശങ്ങളിലെ മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയയുടെ രൂപവുമായി വളരെ സാമ്യമുള്ളതാണ്. മൈറ്റോകോൺഡ്രിയൽ വിഘടനവും സംയോജന നിലയും സെല്ലിലെ Nrf2 ലെവലിനോട് നേരിട്ട് പ്രതികരിക്കുന്നു എന്ന കൗതുകകരമായ ആശയം ഈ ഫലം ഉയർത്തി. എന്നിരുന്നാലും, മറ്റ് Nrf2 സ്റ്റെബിലൈസറുകളും പ്രോട്ടീസോം ഇൻഹിബിറ്റർ MG132, പ്രോ-ഓക്‌സിഡന്റ് tBHQ, അല്ലെങ്കിൽ Nrf2 ഇൻഹിബിറ്ററായ KEAP1 ന്റെ നാക്ക്ഡൗൺ പോലുള്ള ആക്റ്റിവേറ്ററുകളും ഉള്ള കോശങ്ങളുടെ ഉത്തേജനം മൈറ്റോകോൺഡ്രിയൽ ഫ്യൂഷൻ ഉണ്ടാക്കിയില്ല (ചിത്രം 1A, B). ഈ കൃത്രിമത്വങ്ങളാൽ Nrf2-ന്റെ സ്ഥിരത എൻഡോജെനസ് Nrf2-നുള്ള വെസ്റ്റേൺ ബ്ലോട്ടിംഗ് വഴി സ്ഥിരീകരിച്ചു (ചിത്രം 1C). കൂടാതെ, SFN-ഇൻഡ്യൂസ്ഡ് മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയൽ ഫ്യൂഷനു വേണ്ടി Nrf2 ന്റെ ആവിഷ്‌കാരം വിനിയോഗിക്കാവുന്നതാണ്, കാരണം siRNA-യുമായുള്ള എൻഡോജെനസ് Nrf2 ഈ പ്രതിഭാസത്തെ ചെറുക്കുന്നതിൽ പരാജയപ്പെട്ടു (ചിത്രം 1DF). KEAP1 [2] ന്റെ സിസ്റ്റൈൻ അവശിഷ്ടങ്ങൾ സഹസംയോജിതമായി പരിഷ്‌ക്കരിച്ചുകൊണ്ട് KEAP1-Nrf21-ARE പാതയെ SFN ഉത്തേജിപ്പിക്കുന്നതിനാൽ, SFN-ഇൻഡ്യൂസ്ഡ് മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയൽ ഹൈപ്പർഫ്യൂഷൻ ഒരു KEAP1-ആശ്രിത, എന്നാൽ Nrf1 സ്വതന്ത്ര പാതയിലൂടെ ഉത്തേജിപ്പിക്കപ്പെടുന്നുണ്ടോ എന്ന് പരിഹരിക്കാൻ ഞങ്ങൾ KEAP2 നെ ഇടിച്ചു. എന്നിരുന്നാലും, KEAP1 ന്റെ ശോഷണം SFN-ഇൻഡ്യൂസ്ഡ് മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയൽ ഫ്യൂഷൻ റദ്ദാക്കുന്നതിൽ പരാജയപ്പെട്ടു (ചിത്രം 1GI). യഥാർത്ഥത്തിൽ, KEAP1 (ചിത്രം 1G, പാനൽ b വേഴ്സസ് പാനൽ d) യുടെ ശോഷണം മൂലമുണ്ടാകുന്ന പ്രോ-ഫിഷൻ മോർഫോളജിയെ SFN മാറ്റിമറിച്ചു. ഈ ഫലങ്ങൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നത് SFN ചികിത്സ, കാനോനിക്കൽ KEAP1-Nrf2-ARE പാതയിൽ നിന്ന് സ്വതന്ത്രമായി മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയൽ സംയോജനത്തിന് കാരണമാകുകയും മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയൽ ഫിഷന്റെയോ ഫ്യൂഷൻ മെഷിനറിയുടെയോ ഘടകങ്ങളെ SFN നേരിട്ട് ബാധിക്കുന്നുണ്ടോ എന്ന് അന്വേഷിക്കാൻ ഞങ്ങളെ പ്രേരിപ്പിക്കുകയും ചെയ്തു.

ചിത്രം 1 SFN Nrf2/KEAP1-സ്വതന്ത്ര മൈറ്റോകോണ്ട്രിയൽ ഫ്യൂഷൻ ഉണ്ടാക്കുന്നു. (A) RPE-1 സെല്ലുകൾ സൂചിപ്പിച്ച siRNA-കൾ ഉപയോഗിച്ച് കൈമാറ്റം ചെയ്യപ്പെടുകയും 3 ദിവസങ്ങൾക്ക് ശേഷം DMSO അല്ലെങ്കിൽ Nrf2 ആക്റ്റിവേറ്ററുകൾ SFN (50 ?M), MG132 (10 ?M), അല്ലെങ്കിൽ tBHQ (100 ?M) എന്നിവ ഉപയോഗിച്ച് 4 മണിക്കൂർ ചികിത്സിക്കുകയും ചെയ്തു. മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയ (ചുവപ്പ്) ഒരു ആന്റി-ടോം20 ആന്റിബോഡി ഉപയോഗിച്ച് ലേബൽ ചെയ്‌തിരിക്കുന്നു, കൂടാതെ ന്യൂക്ലിയുകൾ (നീല) DAPI ഉപയോഗിച്ച് എതിർക്കുന്നു. (ബി) മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയൽ മോർഫോളജിയുടെ അളവ് കാണിക്കുന്ന ഗ്രാഫ് (എ) ൽ നിന്നുള്ള സ്‌കോറിംഗാണ്. > ഓരോ അവസ്ഥയിലും 50 സെല്ലുകൾ അന്ധമായ രീതിയിൽ വിലയിരുത്തി. (സി) (എ) ൽ നിന്നുള്ള പ്രതിനിധി വെസ്റ്റേൺ ബ്ലോട്ടുകൾ (D) RPE-1 സെല്ലുകൾ 10 nM siRNA ഉപയോഗിച്ച് കൈമാറ്റം ചെയ്യപ്പെട്ടു, 3 ദിവസങ്ങൾക്ക് ശേഷം (A) ൽ ഉള്ളത് പോലെ ഉറപ്പിക്കുന്നതിന് മുമ്പ് 4 മണിക്കൂർ SFN ഉപയോഗിച്ച് ചികിത്സിച്ചു. (ഇ) മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയൽ ഫിനോടൈപ്പ് സ്‌കോറിംഗിന്റെ അളവ് (ഡി) കാണിക്കുന്ന ഗ്രാഫ്. > ഓരോ വ്യവസ്ഥയിലും 100 സെല്ലുകൾ അന്ധമായ രീതിയിൽ വിലയിരുത്തി. (എഫ്) (ഡി) ൽ നിന്നുള്ള പ്രതിനിധി വെസ്റ്റേൺ ബ്ലോട്ടുകൾ (G) സെല്ലുകൾ siCON അല്ലെങ്കിൽ siKEAP1 ഉപയോഗിച്ച് (D) എന്നതിലെ പോലെ കൈമാറ്റം ചെയ്യപ്പെടുകയും ചികിത്സിക്കുകയും ചെയ്തു. (H) മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയൽ മോർഫോളജിയുടെ അടിസ്ഥാനത്തിൽ (ബി) ലും (ഇ) ലും (ജി) നിന്നുള്ള സെല്ലുകൾ സ്‌കോർ ചെയ്‌തു. (I) (G) ൽ നിന്നുള്ള പ്രതിനിധി വെസ്റ്റേൺ ബ്ലോട്ടുകൾ (ബി), (ഇ), (എച്ച്) എന്നിവയിലെ ഡാറ്റ 3 സ്വതന്ത്ര പരീക്ഷണങ്ങളിൽ നിന്ന് സമാഹരിച്ചു, സ്റ്റാറ്റിസ്റ്റിക്കൽ പ്രാധാന്യം നിർണ്ണയിച്ചത് ടു-ടെയിൽഡ് സ്റ്റുഡന്റ്സ് ടി-ടെസ്റ്റാണ്. പിശക് ബാറുകൾ +/- SD പ്രതിഫലിപ്പിക്കുന്നു (ഈ ഫിഗർ ലെജൻഡിലെ വർണ്ണത്തെക്കുറിച്ചുള്ള റഫറൻസുകളുടെ വ്യാഖ്യാനത്തിനായി, വായനക്കാരനെ ഈ ലേഖനത്തിന്റെ വെബ് പതിപ്പിലേക്ക് റഫർ ചെയ്യുന്നു).

സൾഫോറഫെയ്ൻ Drp1-ന്റെ മൈറ്റോകോൺഡ്രിയൽ അസോസിയേഷനെ തകരാറിലാക്കുന്നു

SFN-ചികിത്സ മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയൽ ഹൈപ്പർഫ്യൂഷനെ പ്രേരിപ്പിക്കുന്നുവെന്ന കണ്ടെത്തലിന്റെ അടിസ്ഥാനത്തിൽ, ഈ പ്രതിഭാസം അമിതമായ സംയോജന പ്രവർത്തനത്തിന്റെ അനന്തരഫലമോ അല്ലെങ്കിൽ വിഘടന പ്രവർത്തനത്തിന്റെ തടസ്സമോ ആണെന്ന് ഞങ്ങൾ ന്യായവാദം ചെയ്തു. ഈ രണ്ട് സാധ്യതകൾ തമ്മിൽ വിവേചനം കാണിക്കുന്നതിന്, SFN ന്റെ സാന്നിധ്യത്തിലും അഭാവത്തിലും പെറോക്സിസോമുകളുടെ രൂപഘടന ഞങ്ങൾ താരതമ്യം ചെയ്തു. പെറോക്സിസോമുകൾ മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയയോട് സാമ്യമുള്ളതാണ്, കാരണം അവ ചലനാത്മക അവയവങ്ങളാണ്, അവയുടെ ആകൃതിയും നീളവും നിരന്തരം പ്രവഹിക്കുന്നതാണ് [44]. പെറോക്‌സിസോമുകൾ അവയുടെ പുറം മെംബ്രണിൽ Fis1, Mff എന്നിവ രണ്ടും ഉൾക്കൊള്ളുന്നു, അതിന്റെ അനന്തരഫലമായി, Drp1-മെഡിയേറ്റഡ് ഫിഷന്റെ ലക്ഷ്യങ്ങളാണ് [22], [23]. എന്നിരുന്നാലും, പെറോക്‌സിസോമുകൾ മൈറ്റോകോൺഡ്രിയൽ ശൃംഖലയുടെ ഫ്യൂഷൻ മെഷിനറി ഉപയോഗിക്കുന്നില്ല. പകരം, മെംബ്രണുകളുടെയും പ്രോട്ടീനുകളുടെയും ഡി നോവോ കൂട്ടിച്ചേർക്കലിലൂടെ നിലവിലുള്ള പെറോക്‌സിസോമുകളുടെ നീളം കൂട്ടുന്നതാണ് പെറോക്‌സിസോമൽ വിഘടനത്തെ എതിർക്കുന്നത് [39]. പെറോക്‌സിസോമുകളിൽ Mfn44/1, OPA2 എന്നിവ ഇല്ലാത്തതിനാൽ, ഫിഷൻ മെഷിനറിയെ തടയുന്നതിനുപകരം SFN ഫ്യൂഷൻ മെഷിനറി സജീവമാക്കുകയാണെങ്കിൽ, പെറോക്‌സിസോമിന്റെ ദൈർഘ്യത്തെ ബാധിക്കില്ലെന്ന് ഞങ്ങൾ ന്യായവാദം ചെയ്തു. വാഹനം ചികിത്സിക്കുന്ന സെല്ലുകളിൽ, പെറോക്‌സിസോമുകൾ ഹ്രസ്വവും വൃത്താകൃതിയിലുള്ളതും പങ്ക്റ്റിഫോം അവയവങ്ങളായി നിലനിർത്തുന്നു (ചിത്രം 1, പാനലുകൾ ബി, ഡി). എന്നിരുന്നാലും, കൺട്രോൾ സെല്ലുകളെ അപേക്ഷിച്ച് SFN ചികിത്സ പെറോക്സിസോം ദൈർഘ്യം ~ 2 മടങ്ങ് വർദ്ധിപ്പിച്ചു (ചിത്രം. 2, പാനലുകൾ f, h). കൂടാതെ, പല പെറോക്‌സിസോമുകളും മധ്യഭാഗത്ത് നുള്ളിയെടുത്തു, ഇത് ഒരു സാധ്യതയുള്ള സിഷൻ വൈകല്യത്തെ സൂചിപ്പിക്കുന്നു (ചിത്രം 2, പാനൽ എച്ച്, ആരോഹെഡുകൾ). അതുപോലെ, Drp2 siRNA ഉപയോഗിച്ച് കൈമാറ്റം ചെയ്യപ്പെട്ട കോശങ്ങളിലെ പെറോക്‌സിസോമുകൾ അസാധാരണമായി നീളമുള്ളതാണ് (ചിത്രം. 1, പാനലുകൾ j, l), പെറോക്‌സിസോമൽ വിഘടനത്തിന് Drp2 ആവശ്യമാണെന്ന് സ്ഥിരീകരിക്കുകയും വിഭജന യന്ത്രങ്ങളെ തടസ്സപ്പെടുത്തുന്നതിലൂടെ SFN-ചികിത്സ മൈറ്റോകോണ്ട്രിയൽ, പെറോക്‌സിസോമൽ ഫിനോടൈപ്പുകൾ ഉണ്ടാക്കുകയും ചെയ്യുന്നു.

ചിത്രം 2 SFN പെറോക്സിസോമൽ നീളം കൂട്ടുന്നു. (A) RPE-1 സെല്ലുകൾ 10 nM സൂചിപ്പിക്കപ്പെട്ട siRNA ഉപയോഗിച്ച് കൈമാറ്റം ചെയ്യപ്പെടുകയും 3 ദിവസങ്ങൾക്ക് ശേഷം DMSO അല്ലെങ്കിൽ 50 ?M SFN ഉപയോഗിച്ച് 4 മണിക്കൂർ ചികിത്സിക്കുകയും ചെയ്തു. പെറോക്‌സിസോമുകൾ (പച്ച) ആന്റി-പിഎംപി 70 ആന്റിബോഡി, മൈറ്റോകോണ്‌ഡ്രിയ, മൈറ്റോട്രാക്കർ (ചുവപ്പ്), ഡിഎപിഐ ഉപയോഗിച്ച് ഡിഎൻഎ എന്നിവ ഉപയോഗിച്ച് ലേബൽ ചെയ്തിട്ടുണ്ട്. SFN, Drp1 ശോഷണം എന്നിവ മൂലമുണ്ടാകുന്ന രൂപഘടനയിലെ മാറ്റങ്ങളുടെ ദൃശ്യവൽക്കരണം സുഗമമാക്കുന്നതിന് പെറോക്സിസോമുകളുടെ വലുതാക്കിയ ഇൻസെറ്റുകൾ വലതുവശത്ത് (പാനൽ d, h, l) കാണിച്ചിരിക്കുന്നു. ആരോഹെഡുകൾ സങ്കോച പോയിന്റുകൾ ഹൈലൈറ്റ് ചെയ്യുന്നു. (ഈ ഫിഗർ ലെജൻഡിലെ നിറത്തെക്കുറിച്ചുള്ള പരാമർശങ്ങളുടെ വ്യാഖ്യാനത്തിനായി, വായനക്കാരനെ ഈ ലേഖനത്തിന്റെ വെബ് പതിപ്പിലേക്ക് റഫർ ചെയ്യുന്നു).

SFN എങ്ങനെയാണ് Drp1 ഫംഗ്‌ഷൻ നിയന്ത്രിക്കുന്നതെന്ന് ഞങ്ങൾ അടുത്തതായി നിർണ്ണയിച്ചു. എക്സ്പ്രഷൻ ലെവലുകൾ കുറയ്ക്കൽ, മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയയിലെ റിക്രൂട്ട്‌മെന്റ്/നിലനിർത്തൽ, ഒളിഗോമറൈസേഷൻ അല്ലെങ്കിൽ ജി‌ടി‌പേസിന്റെ എൻ‌സൈമാറ്റിക് പ്രവർത്തനം എന്നിവ സാധ്യതകളിൽ ഉൾപ്പെടുന്നു. ഇവയിലേതെങ്കിലും കുറവുണ്ടായാൽ മൈറ്റോകോൺഡ്രിയൽ വിഘടനവും ഹൈപ്പർഫ്യൂഷനും കുറയും. SFN-ചികിത്സയ്ക്ക് ശേഷം Drp1 പ്രോട്ടീൻ ലെവലിൽ പുനരുൽപ്പാദിപ്പിക്കാവുന്ന മാറ്റങ്ങൾ ഞങ്ങൾ കണ്ടെത്തിയില്ല (ചിത്രം. 1C, 3A), അതിനാൽ Drp1-ന്റെ അർദ്ധായുസ്സ് >1 h [10] ഉള്ള Drp50 ന്റെ സ്ഥിരതയിലോ ആവിഷ്‌കാരത്തിലോ SFN മാറ്റം വരുത്തുന്നില്ലെന്ന് നിഗമനം ചെയ്തു. ഞങ്ങളുടെ SFN ചികിത്സകൾ കുറഞ്ഞ കാലയളവാണ്. അടുത്തതായി, Drp1 മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയയിലേക്കുള്ള റിക്രൂട്ട്‌മെന്റിനെയോ നിലനിർത്തുന്നതിനെയോ SFN ബാധിച്ചിട്ടുണ്ടോ എന്ന് ഞങ്ങൾ അന്വേഷിച്ചു. മൈറ്റോകോൺഡ്രിയൽ ഫ്രാക്ഷനിൽ നിന്ന് Drp1 ന്റെ നഷ്ടം SFN പ്രേരിപ്പിച്ചതായി ഫ്രാക്ഷനേഷൻ പഠനങ്ങൾ കാണിച്ചു (ചിത്രം. 3A, പാതകൾ 7-8, ചിത്രം 3B). മുമ്പ് റിപ്പോർട്ട് ചെയ്തതുപോലെ [43], മിക്ക എൻസൈമുകളും സൈറ്റോപ്ലാസത്തിൽ വസിക്കുന്ന സ്ഥിരമായ അവസ്ഥയിൽ ഏത് സമയത്തും മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയൽ നെറ്റ്‌വർക്കുമായി Drp1 (~ 3%) ന്റെ ഒരു ചെറിയ അംശം മാത്രമേ ബന്ധപ്പെട്ടിട്ടുള്ളൂ (ചിത്രം 3A, പാതകൾ 5-8 ). SFN-ചികിത്സയ്ക്ക് ശേഷം മൈറ്റോകോൺഡ്രിയ-ലോക്കലൈസ്ഡ്, punctate Drp40 foci (ചിത്രം. 1C, D) എന്നിവയിൽ ~3% കുറവ് കാണിക്കുന്ന കോ-ലോക്കലൈസേഷൻ വിശകലനം ഉപയോഗിച്ച് ഈ ഭിന്നസംഖ്യ ഡാറ്റ സ്ഥിരീകരിച്ചു. ഒരുമിച്ച്, ഈ ഡാറ്റ സൂചിപ്പിക്കുന്നത്, SFN പ്രേരിപ്പിച്ച മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയൽ ഫ്യൂഷൻ, കുറഞ്ഞത് ഭാഗികമായെങ്കിലും, മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയയുമായുള്ള Drp1-ന്റെ ദുർബലമായ ബന്ധം മൂലമാണെന്ന്. എൻഡോജെനസ് Drp1 ന്റെ വിശകലനം ലൈവ്-സെൽ മൈക്രോസ്‌കോപ്പി ഉപയോഗിച്ച് GTPase ദൃശ്യമാക്കുന്നതിന് അനുയോജ്യമല്ലാത്തതിനാൽ, Drp1 ന്റെ മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയൽ നിലനിർത്തലും മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയൽ റിക്രൂട്ട്‌മെന്റുമായി SFN ഇടപെടുന്നുണ്ടോ എന്ന് ഞങ്ങളുടെ ഡാറ്റ വേർതിരിച്ചറിയുന്നില്ല.

ചിത്രം 3 SFN മൈറ്റോകോണ്ട്രിയയിൽ നിന്ന് Drp1 നഷ്‌ടപ്പെടുത്തുന്നു. (A) DMSO അല്ലെങ്കിൽ SFN-ന്റെ 1 മണിക്കൂർ പിന്തുടരുന്ന RPE-4 സെല്ലുകളുടെ ഉപസെല്ലുലാർ ഫ്രാക്ഷനേഷൻ. ഹോൾ-സെൽ ലൈസെറ്റുകൾ (WCL), ന്യൂക്ലിയർ (Nuc), സൈറ്റോസോളിക് (സൈറ്റോ), ക്രൂഡ് മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയൽ (Mito) ഭിന്നസംഖ്യകൾ SDS-PAGE വഴി പരിഹരിക്കപ്പെടുകയും സൂചിപ്പിച്ച ആന്റിബോഡികൾ ഉപയോഗിച്ച് വെസ്റ്റേൺ ബ്ലോട്ടിംഗിനായി പ്രോസസ്സ് ചെയ്യുകയും ചെയ്തു. തന്മാത്രാ ഭാരം മാർക്കറുകളുടെ മൈഗ്രേഷൻ ഇടതുവശത്ത് സൂചിപ്പിച്ചിരിക്കുന്നു. (B) (A) ൽ നിന്നുള്ള സൂചിപ്പിച്ച ഭിന്നസംഖ്യകളിൽ Drp1 ന്റെ ഡെൻസിറ്റോമെട്രിക് ക്വാണ്ടിഫിക്കേഷൻ കാണിക്കുന്ന ഗ്രാഫുകൾ. (സി) RPE-1 സെല്ലുകൾ 10 nM siCON അല്ലെങ്കിൽ siDrp1 ഉപയോഗിച്ച് കൈമാറ്റം ചെയ്യപ്പെടുകയും 3 ദിവസത്തിന് ശേഷം DMSO അല്ലെങ്കിൽ SFN ഉപയോഗിച്ച് 4 മണിക്കൂർ ചികിത്സിക്കുകയും ചെയ്തു. Drp1 (പച്ച) ഒരു ആന്റി-Drp1 ആന്റിബോഡി ഉപയോഗിച്ചും മൈറ്റോകോണ്‌ഡ്രിയയെ MitoTracker (ചുവപ്പ്) ഉപയോഗിച്ചും ന്യൂക്ലിയസ് DAPI (നീല) ഉപയോഗിച്ചും ദൃശ്യവൽക്കരിച്ചു. (D) Drp1-ന്റെയും MitoTracker സിഗ്നലിന്റെയും (C)-ൽ നിന്നുള്ള ഓട്ടോമേറ്റഡ് കോ-ലോക്കലൈസേഷൻ വിശകലനം. (B), (D) എന്നിവയിലെ ഡാറ്റ യഥാക്രമം 3, 5 സ്വതന്ത്ര പരീക്ഷണങ്ങളിൽ നിന്ന് സമാഹരിച്ചു, കൂടാതെ സ്റ്റാറ്റിസ്റ്റിക്കൽ പ്രാധാന്യം നിർണ്ണയിച്ചത് ടു-ടെയിൽഡ് സ്റ്റുഡന്റ്സ് ടി-ടെസ്റ്റാണ്. പിശക് ബാറുകൾ +/- SD പ്രതിഫലിപ്പിക്കുന്നു, നക്ഷത്രചിഹ്നങ്ങൾ സ്ഥിതിവിവരക്കണക്ക് പ്രാധാന്യത്തെ സൂചിപ്പിക്കുന്നു. (ഈ ഫിഗർ ലെജൻഡിലെ നിറത്തെക്കുറിച്ചുള്ള പരാമർശങ്ങളുടെ വ്യാഖ്യാനത്തിനായി, വായനക്കാരനെ ഈ ലേഖനത്തിന്റെ വെബ് പതിപ്പിലേക്ക് റഫർ ചെയ്യുന്നു).

Nrf2-ൽ നിന്ന് സ്വതന്ത്രമായ സ്റ്റൗറോസ്പോർട്ടിൻ-ഇൻഡ്യൂസ്ഡ് അപ്പോപ്റ്റോസിസിനെതിരെ സൾഫോറഫെയ്ൻ സംരക്ഷണം നൽകുന്നു

അപ്പോപ്റ്റോസിസ് സമയത്ത് Bax/Bak സൃഷ്ടിച്ച ബാഹ്യ മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയൽ മെംബ്രണിലെ സുഷിരങ്ങൾ രൂപപ്പെടുന്നതിന് മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയൽ വിഘടനം അനുവദനീയമാണെന്ന് മുൻ കൃതികൾ തെളിയിച്ചിട്ടുണ്ട് [11]. അപ്പോപ്റ്റോസിസ് സമയത്ത് Drp1 മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയയിലേക്ക് തിരഞ്ഞെടുക്കപ്പെട്ടതായി കാണിക്കുന്നു [11] കൂടാതെ, ഇതിന് അനുസൃതമായി, ഈ പ്രക്രിയയുടെ തുടക്കത്തിൽ തന്നെ വിഘടിച്ച മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയ നിരീക്ഷിക്കപ്പെട്ടു [27]. നേരെമറിച്ച്, മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയൽ വിഘടനം തടയുന്നത് സൈറ്റോക്രോം സി റിലീസ് അനുവദിക്കുന്ന ബാഹ്യ മെംബ്രൻ സുഷിരങ്ങളുടെ രൂപീകരണം തടയുന്നതിലൂടെ അപ്പോപ്റ്റോസിസിനെ തടയുമെന്ന് കരുതപ്പെടുന്നു [53]. അതനുസരിച്ച്, മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയൽ സംയോജനത്തെ ഉത്തേജിപ്പിക്കുന്നത് സ്‌റ്റോറോസ്‌പോരിൻ (എസ്‌ടിഎസ്) [14] ഉൾപ്പെടെയുള്ള സംയുക്തങ്ങളാൽ പ്രേരിതമായ അപ്പോപ്‌ടോസിസിന്റെ പുരോഗതിയെ വൈകിപ്പിക്കുന്നു. എസ്ടിഎസ്-മെഡിയേറ്റഡ് അപ്പോപ്‌ടോസിസിൽ നിന്ന് RPE-1 സെല്ലുകളെ SFN സംരക്ഷിക്കുന്നുണ്ടോ എന്നും അങ്ങനെയാണെങ്കിൽ, ഇതിന് Nrf2 ആവശ്യമുണ്ടോ എന്നും നിർണ്ണയിക്കാൻ, സജീവമാക്കിയ കാസ്‌പേസ്-3 ന്റെ അടിവസ്‌ത്രമായ പോളി എഡിപി റൈബോസ് പോളിമറേസ് (PARP) ക്ലീവേജ് (PARP) ഉടനടി പ്രേരിപ്പിക്കുന്നതിനുള്ള ഒരു വിശകലനം ഞങ്ങൾ സ്ഥാപിച്ചു. അപ്പോപ്റ്റോസിസ്. RPE-1 സെല്ലുകളുടെ 1 −M STS ഉപയോഗിച്ച് 6 മണിക്കൂർ ചികിത്സിക്കുന്നത് PARP യുടെ വളരെ മിതമായ പിളർപ്പിന് കാരണമായി, എന്നാൽ ഇത് SFN സഹ-ചികിത്സയാൽ തടഞ്ഞു (ഉദാ. ചിത്രം. 4A, ലെയ്ൻ 3 വേഴ്സസ് 4). ഈ പരിശോധനയുടെ കരുത്ത് വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നതിന്, Bcl-XL എന്ന ആന്റി-അപ്പോപ്റ്റോട്ടിക് ഘടകത്തെ ലക്ഷ്യം വച്ചുള്ള siRNA ഉപയോഗിച്ച് കോശങ്ങളെ മുൻകൂട്ടി ചികിത്സിച്ചുകൊണ്ട് STS-ഇൻഡ്യൂസ്ഡ് അപ്പോപ്റ്റോസിസിലേക്ക് ഞങ്ങൾ സെല്ലുകളെ കൂടുതൽ സെൻസിറ്റൈസ് ചെയ്തു. ഈ പ്രീട്രീറ്റ്മെന്റ് Bcl-XL-ന്റെ എക്സ്പ്രഷൻ കുറയ്ക്കുകയും, STS-ന് വിധേയമായ സമയത്തിന്റെ പ്രവർത്തനമായി PARP പിളർപ്പിനെ ഗണ്യമായി പ്രോത്സാഹിപ്പിക്കുകയും ചെയ്തു. പ്രധാനമായും, എസ്‌എഫ്‌എൻ ഉപയോഗിച്ചുള്ള 4 മണിക്കൂർ പ്രീ-ട്രീറ്റ്‌മെന്റ്, എസ്‌ടിഎസുമായി സമ്പർക്കം പുലർത്തുന്ന സെല്ലുകളിലെ പിഎആർപി പിളർപ്പിനെ ലഘൂകരിക്കുന്നു (ചിത്രം. 2 സി, ലെയ്ൻ 4 വേഴ്സസ് 10, ലെയ്ൻ 2 വേഴ്സസ് 4). അതുപോലെ, CRISPR/Cas3 വഴി Nrf4 സ്ഥിരമായി ഇല്ലാതാക്കിയ സെല്ലുകൾ SFN പ്രീ-ട്രീറ്റ്മെന്റ് വഴി STS വിഷബാധയിൽ നിന്ന് താരതമ്യേന സംരക്ഷിച്ചു (ചിത്രം. 5C, ലെയ്ൻ 6 വേഴ്സസ് 2, ലെയ്ൻ 9 വേഴ്സസ് 4, ചിത്രം 11D). ഈ സംരക്ഷണം PARP പിളർപ്പും (ചിത്രം 12C, D) സെല്ലുലാർ മോർഫോളജിയും (ചിത്രം 13E) റീഡ്ഔട്ടുകളായി ഉപയോഗിച്ചു. CRISPR/Cas14 വഴി Nrf4 ശോഷണത്തിന്റെ ഫലപ്രാപ്തി വെസ്റ്റേൺ ബ്ലോട്ടിംഗ് വഴി സ്ഥിരീകരിച്ചു (ചിത്രം 4C, Nrf4 ബ്ലോട്ട്). പ്രവചിച്ചതുപോലെ, ഹൈപ്പർഫ്യൂഷൻ ഫിനോടൈപ്പ് (ചിത്രം 2A) നൽകുന്ന Drp9 ന്റെ സെല്ലുകൾ കുറയുന്നു, SFN (ചിത്രം 4F, G) ഉപയോഗിച്ച് ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്ത നിയന്ത്രണ സെല്ലുകളെ അപേക്ഷിച്ച് STS-നോടുള്ള പ്രതികരണമായി PARP പിളർപ്പിനെ തടഞ്ഞു. Nrf2-ന്റെ സ്ഥിരതയും സജീവമാക്കലും കൂടാതെ Drp1 ഫംഗ്‌ഷൻ പരിമിതപ്പെടുത്താനുള്ള കഴിവ് വഴി അപ്പോപ്‌ടോസിസിനെതിരെ സംരക്ഷണം നൽകുന്ന SFN-യുമായി ഈ കണ്ടെത്തലുകൾ പൊരുത്തപ്പെടുന്നു.

ചിത്രം 4 SFN-ന്റെ സൈറ്റോപ്രൊട്ടക്റ്റീവ് ഇഫക്റ്റുകൾ Nrf2 എക്സ്പ്രഷനിൽ നിന്ന് സ്വതന്ത്രമാണ് (A) RPE-1 സെല്ലുകൾ DMSO അല്ലെങ്കിൽ 50 ?M SFN ഉപയോഗിച്ച് DMSO, 2 ?M സ്റ്റൌറോസ്പോരിൻ (STS) അല്ലെങ്കിൽ 1 ചികിത്സയ്ക്ക് മുമ്പ് 50 മണിക്കൂർ നേരത്തേക്ക് ചികിത്സിച്ചു. എം എറ്റോപോസൈഡ് 6 മണിക്കൂർ നേരത്തേക്ക് PARP വിരുദ്ധ വെസ്റ്റേൺ ബ്ലോട്ടിംഗിനായി പ്രോസസ്സ് ചെയ്തു. (B) RPE-1 സെല്ലുകൾ 2.5 nM siCON, 1 nM siBcl-XL, അല്ലെങ്കിൽ 2.5 nM siBcl-XL എന്നിവ ഉപയോഗിച്ച് കൈമാറ്റം ചെയ്യപ്പെടുകയും 3 ദിവസങ്ങൾക്ക് ശേഷം 1, 2, അല്ലെങ്കിൽ 4 മണിക്കൂർ നേരത്തേക്ക് DMSO അല്ലെങ്കിൽ 6 ?M STS ഉപയോഗിച്ച് ചികിത്സിക്കുകയും ചെയ്തു. പ്രതിനിധി വെസ്റ്റേൺ ബ്ലോട്ടുകൾ കാണിക്കുകയും തന്മാത്രാ ഭാരം മാർക്കറുകളുടെ മൈഗ്രേഷൻ ഇടതുവശത്ത് സൂചിപ്പിക്കുകയും ചെയ്യുന്നു. (C) CRISPR/Cas9- ജനറേറ്റഡ് വൈൽഡ്-ടൈപ്പ് (Nrf2WT), Nrf2 നോക്കൗട്ട് (Nrf2KO) RPE-1 സെല്ലുകൾ 1 nM siBcl-XL ഉപയോഗിച്ച് കൈമാറ്റം ചെയ്യപ്പെടുകയും 3 ദിവസങ്ങൾക്ക് ശേഷം 50 മണിക്കൂർ നേരത്തേക്ക് DMSO അല്ലെങ്കിൽ 2 ?M SFN ഉപയോഗിച്ച് ചികിത്സിക്കുകയും ചെയ്തു. . തുടർന്ന്, കോശങ്ങൾ 1, 2, അല്ലെങ്കിൽ 4 മണിക്കൂർ 6 ?M STS ഉപയോഗിച്ച് ചികിത്സിച്ചു. സൂചിപ്പിച്ചിരിക്കുന്ന ആന്റിബോഡികളോട് കൂടിയ വെസ്റ്റേൺ ബ്ലോട്ടുകൾ കാണിക്കുന്നു. (D) 3 സ്വതന്ത്ര പരീക്ഷണങ്ങളിൽ നിന്ന് മൊത്തം PARP യുടെ (cleaved+uncleaved) ശതമാനമായി cleaved PARP യുടെ അളവ്. പ്രധാനമായി, സെല്ലുകൾ Nrf2 പ്രകടിപ്പിച്ചാലും ഇല്ലെങ്കിലും ക്ലീവഡ് PARP ലെവലുകൾ താരതമ്യപ്പെടുത്താവുന്നതാണ്, STS-ൽ നിന്നുള്ള SFN സംരക്ഷണം ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ ഘടകത്തിൽ നിന്ന് സ്വതന്ത്രമാണെന്ന് സൂചിപ്പിക്കുന്നു. (ഇ) (സി) ൽ നിന്ന് ലൈസേറ്റ് വിളവെടുക്കുന്നതിന് തൊട്ടുമുമ്പ് എടുത്ത 20X ഘട്ട-തീവ്രത ചിത്രങ്ങൾ. സ്കെയിൽ ബാർ=65 മി. (എഫ്) Drp1 ന്റെ ശോഷണം SFN ചികിത്സയായി STS-ൽ നിന്ന് താരതമ്യപ്പെടുത്താവുന്ന സംരക്ഷണം നൽകുന്നുവെന്ന് തെളിയിക്കുന്ന പ്രതിനിധി വെസ്റ്റേൺ ബ്ലോട്ടുകൾ. RPE-1 സെല്ലുകൾ 1 nM siBcl-XL ഉപയോഗിച്ച് കൈമാറ്റം ചെയ്യുകയും കൂടാതെ 10 nM siCON അല്ലെങ്കിൽ 10 nM siDrp1 ഉപയോഗിച്ച് കൈമാറ്റം ചെയ്യുകയും ചെയ്തു. 3 ദിവസങ്ങൾക്ക് ശേഷം, siCON സെല്ലുകൾ (A) ലും (C) ലും ഉള്ളതുപോലെ SFN ഉപയോഗിച്ച് മുൻകൂട്ടി ചികിത്സിക്കുകയും പിന്നീട് വിളവെടുപ്പിന് മുമ്പ് 4 മണിക്കൂർ STS-ലേക്ക് തുറന്ന് കാണിക്കുകയും സൂചിപ്പിച്ച ആന്റിബോഡികൾ ഉപയോഗിച്ച് വെസ്റ്റേൺ ബ്ലോട്ടിംഗിനായി പ്രോസസ്സ് ചെയ്യുകയും ചെയ്തു. (ജി) 3 സ്വതന്ത്ര പരീക്ഷണങ്ങളിൽ നിന്ന് സമാഹരിച്ച (എഫ്) ൽ അവതരിപ്പിച്ച ഡാറ്റയ്ക്ക് (ഡി) സമാനമാണ്. പിശക് ബാറുകൾ +/- SEM പ്രതിഫലിപ്പിക്കുന്നു

സംവാദം

KEAP1-Nrf2-ARE പാത്ത്‌വേയിൽ അതിന്റെ സ്വാധീനത്തിൽ നിന്ന് സ്വതന്ത്രമായി SFN മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയൽ ഫിഷൻ/ഫ്യൂഷൻ ഡൈനാമിക്‌സ് മോഡുലേറ്റ് ചെയ്യുന്നുവെന്ന് ഞങ്ങൾ കണ്ടെത്തി. മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയൽ പ്രവർത്തനരഹിതവും ROS ഉൽ‌പാദനവും തമ്മിലുള്ള ബന്ധവും Nrf2 സജീവമാക്കുന്നതിലൂടെ മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയയിൽ നിന്നുള്ള ഫ്രീ റാഡിക്കലുകളെ ഞെരുക്കേണ്ടതിന്റെ ആവശ്യകതയും കാരണം ഇത് കൗതുകകരമാണ്. പ്രോസ്റ്റേറ്റ് കാൻസർ, ഒബ്‌സ്ട്രക്റ്റീവ് പൾമണറി ഡിസീസ്, സിക്കിൾ സെൽ ഡിസീസ് [30], [7], [10], [47], [XNUMX], [XNUMX], [XNUMX] SFN-ന്റെ ഈ അധിക പ്രവർത്തനപരമായ സ്വാധീനം പ്രാധാന്യമർഹിക്കുന്നതാണ്. XNUMX].

SFN ഒരു ഐസോത്തിയോസയനേറ്റ് [56] ആയതിനാലും Nrf2 ഡീഗ്രേഡേഷനെ [1] അടിച്ചമർത്താൻ ക്രിട്ടിക്കൽ KEAP2 സിസ്റ്റൈനുകളെ നേരിട്ട് അസൈലേറ്റ് ചെയ്തുകൊണ്ട് Nrf21 സിഗ്നലിംഗ് സജീവമാക്കുന്നതിനാലും, ഒരു വിഭജനം അല്ലെങ്കിൽ ഫ്യൂഷൻ ഫാക്‌ടറിന്റെ പ്രവർത്തനത്തെ മോഡുലേറ്റ് ചെയ്തുകൊണ്ട് SFN അതിന്റെ പ്രോ-ഫ്യൂഷൻ ഇഫക്റ്റുകൾ ചെലുത്തുന്നു. . ഞങ്ങളുടെ ഡാറ്റ Drp1 നെ SFN പ്രതികൂലമായി നിയന്ത്രിക്കുന്നതിനെ ശക്തമായി പിന്തുണയ്ക്കുന്നു, എന്നിരുന്നാലും GTPase അസൈലേഷന്റെ നേരിട്ടുള്ള ലക്ഷ്യമാണോ എന്നത് വ്യക്തമാകേണ്ടതുണ്ട്. ഈ വിജ്ഞാന വിടവ് ഉണ്ടായിരുന്നിട്ടും, SFN ചികിത്സയുടെ പ്രതികരണമായി മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയയും പെറോക്‌സിസോമുകളും ഹൈപ്പർഫ്യൂസ് ആകുന്നതിനാൽ Drp1 ന്റെ പ്രവർത്തനം SFN വിട്ടുവീഴ്‌ച ചെയ്യപ്പെടുന്നു, കൂടാതെ ഈ അവയവങ്ങൾ അവയുടെ അവിഭാജ്യ സംഭവങ്ങൾക്കായി Drp1 പങ്കിടുന്നു [38]. കൂടാതെ, മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയയിൽ പ്രാദേശികവൽക്കരിക്കുകയും ശേഖരിക്കപ്പെടുകയും ചെയ്യുന്ന Drp1 ന്റെ അളവ് SFN കുറയ്ക്കുന്നു (ചിത്രം. 3). ഞങ്ങളുടെ പരീക്ഷണങ്ങൾ എല്ലാ എൻഡോജെനസ് പ്രോട്ടീനുകൾ ഉപയോഗിച്ചും നടത്തിയതിനാൽ, മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയൽ ഫിഷൻ സൈറ്റുകളിൽ Drp1 കണ്ടെത്തുന്നത് സ്ഥിരമായ അവസ്ഥയിലാണ്, തൽഫലമായി, ഒരു റിക്രൂട്ട്‌മെന്റും SFN മൂലമുണ്ടാകുന്ന എൻസൈമിന്റെ നിലനിർത്തൽ വൈകല്യവും തമ്മിൽ വേർതിരിച്ചറിയാൻ ഞങ്ങൾക്ക് കഴിയില്ല. കൂടാതെ, Drp1 റിക്രൂട്ട്‌മെന്റ് തടയുന്നതിന് മൈറ്റോകോൺഡ്രിയയിലെ (Fis1 അല്ലെങ്കിൽ Mff) ഒരു റിസപ്റ്ററിനെ SFN അസൈലേറ്റ് ചെയ്യാനുള്ള സാധ്യത ഇല്ലാതാക്കാൻ ഞങ്ങൾക്ക് കഴിയില്ല, Drp1 നേരിട്ട് പരിഷ്‌ക്കരിച്ചതാണെന്ന് ഞങ്ങൾ സംശയിക്കുന്നു. Drp1 ന് ഒമ്പത് സിസ്റ്റൈനുകൾ ഉണ്ട്, അവയിൽ എട്ടെണ്ണം ഒളിഗോമറൈസേഷനായി [3] ആവശ്യമായ മിഡിൽ ഡൊമെയ്‌നിലാണ് വസിക്കുന്നത്, അതിലൊന്ന് Drp1-ന്റെ C-ടെർമിനസിലെ GTPase Effector Domain (GED) ൽ വസിക്കുന്നു. ഈ സിസ്റ്റൈനുകളിൽ ഏതെങ്കിലുമൊരു നേരിട്ടുള്ള അസൈലേഷൻ Drp1-ൽ ഒരു പ്രവർത്തന വൈകല്യത്തിന് കാരണമായേക്കാം, അതിനാൽ മൈറ്റോകോൺഡ്രിയൽ ഡൈനാമിക്സിൽ SFN-ന്റെ സ്വാധീനത്തിന് അടിവരയിടുന്നു. ശ്രദ്ധേയമായി, ഒളിഗോമറൈസേഷനിലെയും കാറ്റലറ്റിക് പ്രവർത്തനത്തിലെയും തകരാറുകൾ മൈറ്റോകോൺഡ്രിയയിൽ Drp1 നിലനിർത്തുന്നത് നിർത്തലാക്കുമെന്ന് മുൻകൂർ ജോലികൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നു [52]. ഈ സിസ്റ്റൈൻ ഫിനോകോപ്പിയുടെ മ്യൂട്ടേഷൻ Drp644 GTPase പ്രവർത്തനത്തെ [1] തടസ്സപ്പെടുത്തുന്ന മ്യൂട്ടേഷനുകൾ കാണിക്കുന്നുവെന്നും ഈ പ്രത്യേക സിസ്റ്റൈൻ തയോൾ-റിയാക്ടീവ് ഇലക്‌ട്രോഫിലുകൾ [4] വഴി പരിഷ്‌ക്കരിക്കപ്പെടുന്നുവെന്നും കാണിക്കുന്ന മുൻ പ്രവർത്തനങ്ങളെ അടിസ്ഥാനമാക്കി GED ഡൊമെയ്‌നിലെ Cys9 പ്രത്യേകിച്ചും ആകർഷകമായ ലക്ഷ്യമാണ്. ഈ ശ്രദ്ധേയമായ ചോദ്യത്തിന്റെ പരിഹാരത്തിന് മാസ് സ്പെക്ട്രോമെട്രിക് മൂല്യനിർണ്ണയം ആവശ്യമാണ്. ചുരുക്കത്തിൽ, ക്ലിനിക്കലി-പ്രസക്തമായ സംയുക്തമായ SFN-നായുള്ള ഒരു പുതിയ സൈറ്റോപ്രൊട്ടക്റ്റീവ് ഫംഗ്ഷൻ ഞങ്ങൾ തിരിച്ചറിഞ്ഞു. മാസ്റ്റർ ആന്റി-ഓക്സിഡന്റ് ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ ഫാക്ടർ Nrf2 സജീവമാക്കുന്നതിനു പുറമേ, SFN മൈറ്റോകോൺഡ്രിയൽ, പെറോക്സിസോമൽ ഫ്യൂഷൻ പ്രോത്സാഹിപ്പിക്കുന്നു, ഈ പ്രഭാവം Nrf2-ൽ നിന്ന് സ്വതന്ത്രമാണ്. മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയലിന്റെയും പെറോക്‌സിസോമൽ ഫിഷന്റെയും പ്രാഥമിക മധ്യസ്ഥനായ GTPase Drp1 ന്റെ പ്രവർത്തനത്തിലെ കുറവ് ഈ പ്രതിഭാസത്തിന് അടിവരയിടുന്നു. SFN-മെഡിയേറ്റഡ് മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയൽ ഫ്യൂഷന്റെ ഒരു പ്രധാന അനന്തരഫലം, കോശങ്ങൾ അപ്പോപ്‌ടോസിസ് ഇൻഡുസർ സ്റ്റൗറോസ്‌പോരിന്റെ വിഷ ഫലങ്ങളെ പ്രതിരോധിക്കും എന്നതാണ്. SFN-ന്റെ ഈ അധിക സൈറ്റോപ്രൊട്ടക്റ്റീവ് പ്രവർത്തനം, പ്രായം പ്രധാന അപകട ഘടകമായ (ഉദാ, പാർക്കിൻസൺസ് രോഗം, അൽഷിമേഴ്‌സ് രോഗം, പ്രായവുമായി ബന്ധപ്പെട്ട മാക്യുലാർ ഡീജനറേഷൻ) നിരവധി ന്യൂറോ ഡിജനറേറ്റീവ് രോഗങ്ങളിൽ പ്രത്യേക ക്ലിനിക്കൽ ഉപയോഗപ്രദമായിരിക്കും, കാരണം ഈ അസുഖങ്ങൾ അപ്പോപ്റ്റോസിസുമായി ബന്ധപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു. Nrf2 [35], [36], [48] ലെവലുകൾ കൂടാതെ/അല്ലെങ്കിൽ ക്രമരഹിതമാക്കൽ.

വസ്തുക്കളും രീതികളും

അപ്പോപ്റ്റോസിസ് പരിശോധനകൾ

ചുവടെ സൂചിപ്പിച്ചിരിക്കുന്നതുപോലെ കോശങ്ങൾ സീഡ് ചെയ്യുകയും siRNA ഉപയോഗിച്ച് കൈമാറ്റം ചെയ്യുകയും ചെയ്തു. മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയൽ സംയോജനം പ്രേരിപ്പിക്കുന്നതിന് കോശങ്ങളെ 50 മണിക്കൂർ നേരത്തേക്ക് 2 ?M സൾഫോറഫേൻ ഉപയോഗിച്ച് ചികിത്സിച്ചു, തുടർന്ന് അപ്പോപ്‌ടോസിസിനെ പ്രേരിപ്പിക്കുന്നതിന് 1 ?M സ്‌റ്റോറോസ്‌പോരിൻ ഉപയോഗിച്ച് ചികിത്സിച്ചു. വിളവെടുപ്പ് സമയത്ത്, മാധ്യമങ്ങൾ വ്യക്തിഗത ട്യൂബുകളിൽ ശേഖരിക്കുകയും പെല്ലറ്റ് അപ്പോപ്‌ടോട്ടിക് സെല്ലുകളിലേക്ക് ഉയർന്ന വേഗതയുള്ള സെൻട്രിഫ്യൂഗേഷന് വിധേയമാക്കുകയും ചെയ്തു. ഈ സെൽ പെല്ലറ്റ് അഡ്‌ഡറന്റ് സെല്ലുകളുമായി സംയോജിപ്പിച്ച് 2 മടങ്ങ് സാന്ദ്രതയുള്ള ലാംലി ബഫറിൽ ലയിപ്പിച്ചു. സാമ്പിളുകൾ ആന്റി PARP വെസ്റ്റേൺ ബ്ലോട്ടിംഗിന് വിധേയമാക്കി.

CRISPR/Cas9 നിർമ്മാണ തലമുറ

LentiCRISPR/eCas9 1.1 സൃഷ്‌ടിക്കാൻ, LentiCRISPR v2 (addgene #52961) ആദ്യം Age1, BamH1 എന്നിവ ഉപയോഗിച്ച് മുറിച്ചു. അടുത്തതായി, eSpCas9 9-ൽ നിന്നുള്ള SpCas1.1 (അഡ്‌ജെൻ #71814) ഇനിപ്പറയുന്ന പ്രൈമറുകൾ ഉപയോഗിച്ച് Age1, BamH1 ഓവർഹാംഗുകൾ ഉപയോഗിച്ച് PCR ആംപ്ലിഫൈ ചെയ്‌തു (ഫോർവേഡ് AGCGCACCGGTTCTAGAGCGCTGCCACCATGGACTATAAGGACCACGAT, മുകളിലേയ്‌ക്ക് GATCGTCGTT, GATCGTCGTC ആയി മുറിച്ചിരിക്കുന്നു. Benchling.com ഉപയോഗിച്ചാണ് sgRNA സീക്വൻസുകൾ നിർണ്ണയിച്ചത്. ഏറ്റവും ഉയർന്ന ടാർഗെറ്റും കുറഞ്ഞ ഓഫ് ടാർഗെറ്റും ഉള്ള കോഡിംഗ് സീക്വൻസ് ടാർഗെറ്റുചെയ്യാൻ പാരാമീറ്ററുകൾ സജ്ജീകരിച്ചു. താഴെ സീക്വൻസുകൾ (അനുക്രമം ടാർഗെറ്റുചെയ്യൽ അണ്ടർലൈൻ എച്ച്എസ് സ്ഗ്ന്ഫെ൨ല്൨ # 2 അർത്ഥത്തിൽ ചച്ച്ഗ്ച്ഗച്ഗ്ഗഅഅഗഗ്തത്ഗഗ്ച്, അംതിസെംസെ അഅഅച്ഗ്ച്ത്ചതച്ത്ച്ത്ത്ത്ച്ച്ഗ്ത്ച്ഗ്ച്; എച്ച്.എസ് സ്ഗ്ന്ഫെ൨ല്൨ # 2 അർത്ഥത്തിൽ ചച്ച്ഗ്ഗ്ത്ത്ത്ച്ത്ഗച്ത്ഗ്ഗത്ഗ്ത്ഗ്ച്ത്, അംതിസെംസെ അഅഅചഗ്ചചത്ച്ചഗ്ത്ചഗഅഅച്ച്; എച്ച്.എസ് സ്ഗ്ന്ഫെ൨ല്൨ # 1 അർത്ഥത്തിൽ ചച്ച്ഗ്ഗഗ്തഗ്ത്ത്ഗ്ഗ്ചഗത്ച്ചച്, അംതിസെംസെ അഅഅച്ഗ്ത്ഗ്ഗത്ച്ത്ഗ്ച്ചഅച്തച്ത്ച്ച്) അംനെഅലെദ് കയറി ബ്സ്ംബ്൧ ലിഗതെദ് ചെയ്തു ലെംതിച്രിസ്പ്ര് / എചസ്൯ 2 മുറിച്ചു. ലെന്റിവൈറൽ അണുബാധയുള്ള RPE-2 സെല്ലുകൾ പ്യൂറോമൈസിൻ ഉപയോഗിച്ച് തിരഞ്ഞെടുത്ത് ഒരു പൂൾ പോപ്പുലേഷനായി നിലനിർത്തി. ഇമ്മ്യൂണോ ഫ്ലൂറസെൻസും വെസ്റ്റേൺ ബ്ലോട്ടിംഗും ഉപയോഗിച്ചാണ് നോക്കൗട്ട് സ്ഥിരീകരിച്ചത്.

കോശ സംസ്ക്കാരവും കൈമാറ്റങ്ങളും

ടെലോമറേസ് (RPE-1) (ATCC) ഉപയോഗിച്ച് രൂപാന്തരപ്പെട്ട ഹ്യൂമൻ റെറ്റിന പിഗ്മെന്റ് എപ്പിത്തീലിയൽ സെല്ലുകൾ, പെൻസിലിൻ, സ്ട്രെപ്റ്റോമൈസിൻ, 1X നോൺ-സെൻഷ്യൽ കോക്ക്‌ടെയിൽ (ലൈഫ് കോക്ക്‌ടെയ്‌ൽ കോക്ക്‌ടെയിൽ കോക്ക്‌ടെയ്‌ൽ കോക്ക്‌ടെയിൽ) എന്നിവയോടൊപ്പം 1 g/L ഗ്ലൂക്കോസ് അടങ്ങിയ ഡൽബെക്കോയുടെ മോഡിഫൈഡ് ഈഗിൾ മീഡിയത്തിൽ (DMEM) സംസ്‌കരിക്കപ്പെട്ടു. കൂടാതെ 10% ഫെറ്റൽ ബോവിൻ സെറം (ലൈഫ് ടെക്നോളജീസ്). siRNA-കൈമാറ്റങ്ങൾക്കായി, 30,000–35,000 സെല്ലുകൾ/mL ഒറ്റരാത്രികൊണ്ട് വിത്തുപാകി. സെറം ഫ്രീ ഡിഎംഇഎമ്മിൽ ലയിപ്പിച്ച 10 എൻഎം സിആർഎൻഎ സെല്ലുകൾക്ക് ലഭിച്ചു, കൂടാതെ 0.3% ഇന്റർഫെറിൻ ട്രാൻസ്ഫെക്ഷൻ റീജന്റുമായി (പോളിപ്ലസ്) സംയോജിപ്പിച്ചു. അപ്പോപ്റ്റോസിസ് സെൻസിറ്റൈസേഷനായി, കോശങ്ങൾക്ക് 1 nM Bcl-XL siRNA ലഭിച്ചു. കൈമാറ്റം കഴിഞ്ഞ് 2-3 ദിവസങ്ങൾക്ക് ശേഷം കോശങ്ങൾ വിളവെടുത്തു.

രാസവസ്തുക്കൾ, ആന്റിബോഡികൾ, സിആർഎൻഎ ഒലിഗോസ്

?-tubulin (സെൽ സിഗ്നലിംഗ്), ?-tubulin (Sigma), Drp1 (BD Biosciences), KEAP1 (Proteintech), Lamin B1 (Abcam), PARP (സെൽ സിഗ്നലിംഗ്), PMP70 (Abcam), Tom20 (BD Bioscience) എന്നിവയ്‌ക്കെതിരായ ആന്റിബോഡികൾ ) വെസ്റ്റേൺ ബ്ലോട്ടിംഗിനും ഇമ്മ്യൂണോഫ്ലൂറസൻസിനും 1:1000 നേർപ്പിക്കൽ ഉപയോഗിച്ചു. ഇൻ-ഹൗസ്, ആന്റി-എൻആർഎഫ്2 റാബിറ്റ് ആന്റിബോഡി 1:2000-ൽ വെസ്റ്റേൺ ബ്ലോട്ടിംഗിനായി ഉപയോഗിച്ചു [34], [59]. യഥാക്രമം 50 ?M, 1 ?M എന്നിവയിൽ സൾഫോറഫേൻ (സിഗ്മ), സ്റ്റൗറോസ്പോരിൻ (ടോക്രിസ്) എന്നിവ ഉപയോഗിച്ചു. Drp1 (Dharmacon), Nrf2 (Dharmacon), KEAP1 (സെൽ സിഗ്നലിംഗ്), Bcl-XL (സെൽ സിഗ്നലിംഗ്) എന്നിവയ്‌ക്കെതിരായ siRNAകൾ മറ്റുവിധത്തിൽ സൂചിപ്പിച്ചിട്ടില്ലെങ്കിൽ 10 nM-ൽ ഉപയോഗിച്ചു.

ഇമ്മ്യൂണോ ഫ്ലൂറസെൻസും വിവോ ലേബലിംഗും

18 എംഎം ഗ്ലാസ് കവർസ്ലിപ്പുകളിൽ വിതച്ച കോശങ്ങൾ വാഹനമോ മരുന്നോ ഉപയോഗിച്ച് ചികിത്സിച്ചു, 3.7% ഫോർമാൽഡിഹൈഡിൽ ഉറപ്പിക്കുകയും 0.2% ട്രൈറ്റൺ X-100/PBS-ൽ 10 മിനിറ്റ് ഐസിൽ പെർമെബിലൈസ് ചെയ്യുകയും ചെയ്തു. പ്രാഥമിക ആന്റിബോഡികൾ 3% ബോവിൻ സെറം ആൽബുമിൻ (BSA) യിൽ PBS-ൽ ഒറ്റരാത്രികൊണ്ട് 4 °C-ൽ ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്തു. PBS വാഷുകൾക്ക് ശേഷം, 1% BSA/PBS-ൽ സ്പീഷീസ്-അനുയോജ്യമായ, Alexa488- അല്ലെങ്കിൽ Alexa546-, സംയോജിത ദ്വിതീയ ആന്റിബോഡികൾ (1:1000 നേർപ്പിച്ചത്), 0.1 ?g/mL DAPI (സിഗ്മ) എന്നിവയിൽ 3 മണിക്കൂർ കോശങ്ങൾ ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്തു. മൈറ്റോകോൺഡ്രിയയെ ആന്റി-ടോം20 ഇമ്മ്യൂണോഫ്ലൂറസെൻസ് വഴിയോ അല്ലെങ്കിൽ 200 nM MitoTracker Red CMXRos (മോളിക്യുലർ പ്രോബ്സ്, Inc.) സെറം രഹിത DMEM-ൽ 30 മിനിറ്റ് നേരം 37 −C-ൽ ഫിക്സേഷനുമുമ്പ് കോശങ്ങൾ ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്തോ ദൃശ്യവൽക്കരിച്ചു.

മൈക്രോസ്കോപ്പിയും ഇമേജ് വിശകലനവും

ഒരു LSM710 കോൺഫോക്കൽ മൈക്രോസ്കോപ്പിൽ (കാൾ സീസ്) ഇമ്മ്യൂണോഫ്ലൂറസെൻസ് സാമ്പിളുകൾ കണ്ടു. 63X അല്ലെങ്കിൽ 100X എണ്ണ നിമജ്ജന ലക്ഷ്യങ്ങൾ ഉപയോഗിച്ച് മൈക്രോഗ്രാഫുകൾ പകർത്തി, അഡോബ് ഫോട്ടോഷോപ്പ് CS6 ഉപയോഗിച്ച് ക്രമീകരിച്ച് മെച്ചപ്പെടുത്തിയ ചിത്രങ്ങൾ. സാമ്പിളുകളുടെ ഐഡന്റിറ്റിയിൽ അന്ധത കാണിക്കുമ്പോൾ സ്വമേധയാ സജ്ജീകരിച്ച പരിധികളുള്ള Carl Zeiss LSM710 കോ-ലോക്കലൈസേഷൻ സവിശേഷത ഉപയോഗിച്ച് കോ-ലോക്കലൈസേഷൻ വിശകലനം നടത്തി. സൂചിപ്പിച്ചിട്ടില്ലെങ്കിൽ ഉടനീളം സ്കെയിൽ ബാറുകൾ 10 മീറ്ററാണ്. അന്ധമായ സ്കോറിംഗ് വഴി മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയൽ മോർഫോളജി വിലയിരുത്തി. ഒരു കോശത്തിന്റെ മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയ ഒന്നിലധികം, വൃത്താകൃതിയിലുള്ള, വിവേചനപരമായ പങ്ക്റ്റയായി നിലനിർത്തിയാൽ, കോശം "വിഘടനം" ആയി സ്‌കോർ ചെയ്യപ്പെടും. വ്യക്തിഗത മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയയെ വേർതിരിച്ചറിയാൻ കഴിയാതെ വരികയും മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയൽ ശൃംഖല മുഴുവനും തുടർച്ചയായി ദൃശ്യമാകുകയും ചെയ്‌താൽ, കോശം 'ഫ്യൂഷൻ' ആയി സ്‌കോർ ചെയ്യപ്പെടും. ക്ലസ്റ്ററിംഗ് മൈറ്റോകോൺഡ്രിയ ഉൾപ്പെടെയുള്ള മറ്റെല്ലാ സെല്ലുകളും "ഇന്റർമീഡിയറ്റ്" ആയി സ്കോർ ചെയ്തു.

ഉപസെല്ലുലാർ ഭിന്നസംഖ്യകൾ

RPE-1 സെല്ലുകൾ സംഗമസ്ഥാനത്തേക്ക് വളർന്നു. ഒരു PBS വാഷിനെത്തുടർന്ന്, കോശങ്ങൾ 600°g-ൽ 10 മിനിറ്റ് കേന്ദ്രീകൃതമാക്കുകയും 600 ?L ഐസൊലേഷൻ ബഫറിൽ (210 mM മാനിറ്റോൾ, 70 mM സുക്രോസ്, 5 mM MOPS, 1 mM EDTA pH 7.4+1 mM PMSF) വീണ്ടും നൽകുകയും ചെയ്തു. ഒരു ഡൗൺസ് ഹോമോജെനൈസറിൽ സസ്പെൻഷൻ 30 തവണ ലൈസ് ചെയ്തു. ഹോമോജെനേറ്റിന്റെ ഒരു അംശം മുഴുവൻ സെൽ ലൈസറ്റായി സംരക്ഷിക്കപ്പെട്ടു. ശേഷിക്കുന്ന ന്യൂക്ലിയസ്സുകളും അൺലൈസ് ചെയ്യാത്ത കോശങ്ങളും മായ്‌ക്കുന്നതിന് സൂപ്പർനാറ്റന്റുകളെ 800 ഗ്രാം 10 മിനിറ്റിന് സെൻട്രിഫ്യൂഗേഷന് വിധേയമാക്കി. പെല്ലറ്റ് മൈറ്റോകോൺ‌ഡ്രിയയിലേക്ക് 1500 മിനിറ്റ് നേരത്തേക്ക് 10 ഗ്രാം സെൻട്രിഫ്യൂഗേഷന് വിധേയമാക്കി. സൂപ്പർനാറ്റന്റ് "സൈറ്റോസോളിക് ഫ്രാക്ഷൻ" ആയി സംരക്ഷിക്കപ്പെട്ടു. പെല്ലറ്റ് പിബിഎസ് ഉപയോഗിച്ച് മൃദുവായി കഴുകി ഐസൊലേഷൻ ബഫറിൽ വീണ്ടും ചേർത്തു. ഓരോ ഭിന്നസംഖ്യയുടെയും പ്രോട്ടീൻ സാന്ദ്രത ബിസിൻകോണിനിക് ആസിഡ് (ബിസിഎ) അസ്സേ ഉപയോഗിച്ച് അളക്കുകയും തുല്യമായ അളവിൽ പ്രോട്ടീൻ എസ്ഡിഎസ്-പേജ് പരിഹരിക്കുകയും ചെയ്തു.

വെസ്റ്റേൺ ബ്ലോട്ടിംഗ്

കോശങ്ങൾ PBS-ൽ കഴുകി, 2 മടങ്ങ് കേന്ദ്രീകൃതമായ Laemmli സോലൂബിലൈസിംഗ് ബഫറിൽ ലയിപ്പിച്ചു (100 mM Tris [pH 6.8], 2% SDS, 0.008% ബ്രോമോഫെനോൾ ബ്ലൂ, 2% 2-mercaptoethanol, 26.3% Glycerol, Pyrin0.001%). സോഡിയം ഡോഡെസിൽ സൾഫേറ്റ് (എസ്ഡിഎസ്) പോളിഅക്രിലാമൈഡ് ജെല്ലുകളിൽ ലോഡുചെയ്യുന്നതിന് മുമ്പ് ലൈസറ്റുകൾ 5 മിനിറ്റ് തിളപ്പിച്ചു. പ്രോട്ടീനുകൾ നൈട്രോസെല്ലുലോസ് മെംബ്രണുകളിലേക്ക് മാറ്റുകയും 1% പാൽ/ടിബിഎസ്ടിയിൽ 5 മണിക്കൂർ നേരത്തേക്ക് ചർമ്മം തടയുകയും ചെയ്തു. പ്രൈമറി ആന്റിബോഡികൾ 5% പാൽ/ടിബിഎസ്ടിയിൽ ലയിപ്പിച്ച് ബ്ലോട്ട് ഉപയോഗിച്ച് ഒറ്റരാത്രികൊണ്ട് 4 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ ഇൻകുബേറ്റ് ചെയ്തു. നിറകണ്ണുകളോടെ പെറോക്സിഡേസ് (എച്ച്ആർപി) - സംയോജിത ദ്വിതീയ ആന്റിബോഡികൾ 5% പാൽ/ടിബിഎസ്ടിയിൽ ലയിപ്പിച്ചു. മെച്ചപ്പെടുത്തിയ കെമിലുമിനെസെൻസ് ഉപയോഗിച്ച് ബ്ലോട്ടുകൾ പ്രോസസ്സ് ചെയ്യുകയും ഇമേജ്ജെ സോഫ്റ്റ്വെയർ ഉപയോഗിച്ച് ഡെൻസിറ്റോമെട്രിക് ക്വാണ്ടിഫിക്കേഷനുകൾ നടത്തുകയും ചെയ്തു.

ഡോ ജിമെനെസ് വൈറ്റ് കോട്ട്

ബ്രോക്കോളി, കാബേജ്, കോളിഫ്‌ളവർ, കാലെ, കോളാർഡുകൾ എന്നിവയുൾപ്പെടെയുള്ള ക്രൂസിഫറസ് പച്ചക്കറികളിൽ നിന്ന് ലഭിക്കുന്ന ഓർഗാനോസൾഫർ വസ്തുക്കളുടെ ഐസോതിയോസയനേറ്റ് ശേഖരത്തിൽ നിന്നുള്ള ഒരു രാസവസ്തുവാണ് സൾഫോറഫേൻ. മൈറോസിനേസ് എന്ന എൻസൈം ഗ്ലൂക്കോസിനോലേറ്റായ ഗ്ലൂക്കോറഫാനിനെ സൾഫോറാഫേനാക്കി മാറ്റുമ്പോൾ സൾഫോറാഫെയ്ൻ ഉത്പാദിപ്പിക്കപ്പെടുന്നു, ഇത് സൾഫോറഫാൻ-ഗ്ലൂക്കോസിനോലേറ്റ് എന്നും അറിയപ്പെടുന്നു. ബ്രോക്കോളി മുളകളിലും കോളിഫ്ലവറിലും ഗ്ലൂക്കോറഫാനിൻ അല്ലെങ്കിൽ സൾഫോറാഫേനിന്റെ മുൻഗാമിയാണ് ഏറ്റവും ഉയർന്ന സാന്ദ്രത. വിവിധ ആരോഗ്യപ്രശ്നങ്ങൾ തടയുന്നതിന് സൾഫോറാഫെയ്ൻ മനുഷ്യ ശരീരത്തിന്റെ ആന്റിഓക്‌സിഡന്റ് കഴിവുകൾ വർദ്ധിപ്പിക്കുമെന്ന് ഗവേഷണ പഠനങ്ങൾ തെളിയിച്ചിട്ടുണ്ട്. ഡോ. അലക്സ് ജിമെനെസ് ഡിസി, സിസിഎസ്ടി ഇൻസൈറ്റ്

കാൻസർ, മരണനിരക്ക്, വാർദ്ധക്യം, മസ്തിഷ്കം, പെരുമാറ്റം, ഹൃദ്രോഗം എന്നിവയിലും അതിലേറെ കാര്യങ്ങളിലും സൾഫോറഫേനും അതിന്റെ ഫലങ്ങളും

നിങ്ങളുടെ ഭക്ഷണത്തിൽ നിങ്ങൾക്ക് ലഭിക്കുന്ന ഏറ്റവും പ്രധാനപ്പെട്ട സസ്യ സംയുക്തങ്ങളിൽ ചിലതാണ് ഐസോത്തിയോസയനേറ്റുകൾ. ഈ വീഡിയോയിൽ ഞാൻ അവർക്കായി ഇതുവരെ ഉണ്ടാക്കിയിട്ടുള്ളതിൽ വച്ച് ഏറ്റവും സമഗ്രമായ കേസ് ഉണ്ടാക്കുന്നു. ചെറിയ ശ്രദ്ധാ കാലയളവ്? ചുവടെയുള്ള സമയ പോയിന്റുകളിലൊന്നിൽ ക്ലിക്കുചെയ്‌ത് നിങ്ങളുടെ പ്രിയപ്പെട്ട വിഷയത്തിലേക്ക് പോകുക. മുഴുവൻ ടൈംലൈൻ ചുവടെ.

പ്രധാന വിഭാഗങ്ങൾ:

  • 00:01:14 - കാൻസറും മരണനിരക്കും
  • 00:19:04 - വാർദ്ധക്യം
  • 00:26:30 - തലച്ചോറും പെരുമാറ്റവും
  • 00:38:06 - ഫൈനൽ റീക്യാപ്പ്
  • 00:40:27 - ഡോസ്

മുഴുവൻ ടൈംലൈൻ:

  • 00:00:34 - വീഡിയോയുടെ പ്രധാന ശ്രദ്ധാകേന്ദ്രമായ സൾഫോറാഫേനിന്റെ ആമുഖം.
  • 00:01:14 - ക്രൂസിഫറസ് പച്ചക്കറി ഉപഭോഗവും എല്ലാ കാരണങ്ങളാൽ മരണനിരക്കും കുറയുന്നു.
  • 00:02:12 - പ്രോസ്റ്റേറ്റ് കാൻസർ സാധ്യത.
  • 00:02:23 - മൂത്രാശയ കാൻസർ സാധ്യത.
  • 00:02:34 - പുകവലിക്കാരിൽ ശ്വാസകോശ അർബുദം ഉണ്ടാകാനുള്ള സാധ്യത.
  • 00:02:48 - സ്തനാർബുദ സാധ്യത.
  • 00:03:13 - സാങ്കൽപ്പികം: നിങ്ങൾക്ക് ഇതിനകം കാൻസർ ഉണ്ടെങ്കിൽ എന്തുചെയ്യും? (ഇടപെടൽ)
  • 00:03:35 - ക്യാൻസറിനും മരണനിരക്കും അനുബന്ധ ഡാറ്റയെ നയിക്കുന്ന വിശ്വസനീയമായ സംവിധാനം.
  • 00:04:38 - സൾഫോറഫേനും ക്യാൻസറും.
  • 00:05:32 - എലികളിലെ മൂത്രാശയ ട്യൂമർ വികസനത്തിൽ ബ്രോക്കോളി മുളപ്പിച്ച സത്തിൽ ശക്തമായ സ്വാധീനം കാണിക്കുന്ന മൃഗ തെളിവുകൾ.
  • 00:06:06 - പ്രോസ്റ്റേറ്റ് കാൻസർ രോഗികളിൽ സൾഫോറാഫേനിന്റെ നേരിട്ടുള്ള സപ്ലിമെന്റിന്റെ പ്രഭാവം.
  • 00:07:09 - യഥാർത്ഥ ബ്രെസ്റ്റ് ടിഷ്യുവിലെ ഐസോത്തിയോസയനേറ്റ് മെറ്റബോളിറ്റുകളുടെ ബയോഅക്യുമുലേഷൻ.
  • 00:08:32 - സ്തനാർബുദ മൂലകോശങ്ങളുടെ തടസ്സം.
  • 00:08:53 - ചരിത്രപാഠം: പ്രാചീന റോമിൽ പോലും ബ്രാസിക്കകൾക്ക് ആരോഗ്യപരമായ ഗുണങ്ങളുണ്ടെന്ന് സ്ഥാപിക്കപ്പെട്ടു.
  • 00:09:16 - കാർസിനോജൻ വിസർജ്ജനം (ബെൻസീൻ, അക്രോലിൻ) വർദ്ധിപ്പിക്കാനുള്ള സൾഫോറാഫേന്റെ കഴിവ്.
  • 00:09:51 - ആന്റിഓക്‌സിഡന്റ് പ്രതികരണ ഘടകങ്ങൾ വഴി ഒരു ജനിതക സ്വിച്ച് ആയി NRF2.
  • 00:10:10 - NRF2 ആക്ടിവേഷൻ എങ്ങനെയാണ് ഗ്ലൂട്ടത്തയോൺ-എസ്-കോൺജഗേറ്റുകൾ വഴി കാർസിനോജൻ വിസർജ്ജനം വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നത്.
  • 00:10:34 - ബ്രസ്സൽസ് മുളകൾ ഗ്ലൂട്ടത്തയോൺ-എസ്-ട്രാൻസ്ഫെറേസ് വർദ്ധിപ്പിക്കുകയും ഡിഎൻഎ കേടുപാടുകൾ കുറയ്ക്കുകയും ചെയ്യുന്നു.
  • 00:11:20 - ബ്രൊക്കോളി മുളപ്പിച്ച പാനീയം ബെൻസീൻ വിസർജ്ജനം 61% വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നു.
  • 00:13:31 - ബ്രൊക്കോളി മുളപ്പിച്ച ഹോമോജെനേറ്റ് മുകളിലെ ശ്വാസനാളത്തിൽ ആന്റിഓക്‌സിഡന്റ് എൻസൈമുകൾ വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നു.
  • 00:15:45 - ക്രൂസിഫറസ് പച്ചക്കറി ഉപഭോഗവും ഹൃദ്രോഗ മരണവും.
  • 00:16:55 - ബ്രോക്കോളി മുളപ്പിച്ച പൊടി രക്തത്തിലെ ലിപിഡുകളും ടൈപ്പ് 2 പ്രമേഹരോഗികളിൽ മൊത്തത്തിലുള്ള ഹൃദ്രോഗ സാധ്യതയും മെച്ചപ്പെടുത്തുന്നു.
  • 00:19:04 - പ്രായമാകൽ വിഭാഗത്തിന്റെ തുടക്കം.
  • 00:19:21 - സൾഫോറഫേൻ അടങ്ങിയ ഭക്ഷണക്രമം വണ്ടുകളുടെ ആയുസ്സ് 15 മുതൽ 30% വരെ വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നു (ചില അവസ്ഥകളിൽ).
  • 00:20:34 - ദീർഘായുസ്സിന് കുറഞ്ഞ വീക്കം പ്രാധാന്യം.
  • 00:22:05 - ക്രൂസിഫറസ് പച്ചക്കറികളും ബ്രൊക്കോളി മുളപ്പിച്ച പൊടിയും മനുഷ്യരിൽ പലതരം കോശജ്വലന മാർക്കറുകൾ കുറയ്ക്കുന്നതായി തോന്നുന്നു.
  • 00:23:40 - മിഡ്-വീഡിയോ റീക്യാപ്പ്: കാൻസർ, പ്രായമാകൽ വിഭാഗങ്ങൾ
  • 00:24:14 - വാർദ്ധക്യത്തിൽ സൾഫോറഫെയ്ൻ അഡാപ്റ്റീവ് ഇമ്മ്യൂൺ ഫംഗ്ഷൻ മെച്ചപ്പെടുത്തുമെന്ന് മൗസ് പഠനങ്ങൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നു.
  • 00:25:18 - കഷണ്ടിയുടെ ഒരു മൗസ് മോഡലിൽ സൾഫോറഫെയ്ൻ മുടി വളർച്ച മെച്ചപ്പെടുത്തി. ചിത്രം 00:26:10.
  • 00:26:30 - തലച്ചോറിന്റെയും പെരുമാറ്റ വിഭാഗത്തിന്റെയും തുടക്കം.
  • 00:27:18 - ഓട്ടിസത്തിൽ ബ്രോക്കോളി മുളപ്പിച്ച സത്തിൽ പ്രഭാവം.
  • 00:27:48 - സ്കീസോഫ്രീനിയയിൽ ഗ്ലൂക്കോറഫാനിന്റെ പ്രഭാവം.
  • 00:28:17 - ഡിപ്രഷൻ ചർച്ചയുടെ തുടക്കം (വിശ്വസനീയമായ മെക്കാനിസവും പഠനങ്ങളും).
  • 00:31:21 - സമ്മർദ്ദം മൂലമുണ്ടാകുന്ന വിഷാദരോഗത്തിന്റെ 10 വ്യത്യസ്ത മാതൃകകൾ ഉപയോഗിച്ചുള്ള മൗസ് പഠനം, ഫ്ലൂക്സൈറ്റിൻ (പ്രോസാക്ക്) പോലെ ഫലപ്രദമാണെന്ന് കാണിക്കുന്നു.
  • 00:32:00 - എലികളിൽ ഗ്ലൂക്കോറഫാനിൻ നേരിട്ട് കഴിക്കുന്നത് സാമൂഹിക തോൽവി സ്ട്രെസ് മോഡലിൽ നിന്നുള്ള വിഷാദം തടയുന്നതിന് സമാനമായി ഫലപ്രദമാണെന്ന് പഠനം കാണിക്കുന്നു.
  • 00:33:01 - ന്യൂറോഡീജനറേഷൻ വിഭാഗത്തിന്റെ തുടക്കം.
  • 00:33:30 - സൾഫോറഫെയ്ൻ, അൽഷിമേഴ്സ് രോഗം.
  • 00:33:44 - സൾഫോറഫെയ്ൻ, പാർക്കിൻസൺസ് രോഗം.
  • 00:33:51 - സൾഫോറഫേൻ, ഹങ്ടിംഗ്ടൺസ് രോഗം.
  • 00:34:13 - സൾഫോറഫേൻ ഹീറ്റ് ഷോക്ക് പ്രോട്ടീനുകൾ വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നു.
  • 00:34:43 - ട്രോമാറ്റിക് ബ്രെയിൻ ഇൻജുറി വിഭാഗത്തിന്റെ തുടക്കം.
  • 00:35:01 - ടിബിഐക്ക് ശേഷം സൾഫോറാഫെയ്ൻ കുത്തിവയ്ക്കുന്നത് മെമ്മറി മെച്ചപ്പെടുത്തുന്നു (മൗസ് പഠനം).
  • 00:35:55 ​​- സൾഫോറഫേനും ന്യൂറോണൽ പ്ലാസ്റ്റിറ്റിയും.
  • 00:36:32 - എലികളിലെ ടൈപ്പ് II പ്രമേഹത്തിന്റെ മാതൃകയിൽ സൾഫോറഫെയ്ൻ പഠനം മെച്ചപ്പെടുത്തുന്നു.
  • 00:37:19 - സൾഫോറഫെയ്ൻ, ഡുചെൻ മസ്കുലർ ഡിസ്ട്രോഫി.
  • 00:37:44 - മസിൽ സാറ്റലൈറ്റ് സെല്ലുകളിൽ മയോസ്റ്റാറ്റിൻ തടസ്സം (ഇൻ വിട്രോ).
  • 00:38:06 - ലേറ്റ്-വീഡിയോ റീക്യാപ്പ്: മരണനിരക്കും ക്യാൻസറും, ഡിഎൻഎ കേടുപാടുകൾ, ഓക്സിഡേറ്റീവ് സമ്മർദ്ദവും വീക്കവും, ബെൻസീൻ വിസർജ്ജനം, ഹൃദയ സംബന്ധമായ അസുഖം, ടൈപ്പ് II പ്രമേഹം, തലച്ചോറിലെ ഫലങ്ങൾ (വിഷാദം, ഓട്ടിസം, സ്കീസോഫ്രീനിയ, ന്യൂറോ ഡിജനറേഷൻ), NRF2 പാത.
  • 00:40:27 - ബ്രോക്കോളി മുളകളുടെയോ സൾഫോറാഫേന്റെയോ അളവ് കണ്ടെത്തുന്നതിനെക്കുറിച്ചുള്ള ചിന്തകൾ.
  • 00:41:01 - വീട്ടിൽ മുളയ്ക്കുന്നതിനെക്കുറിച്ചുള്ള കഥകൾ.
  • 00:43:14 - പാചക താപനിലയിലും സൾഫോറഫേൻ പ്രവർത്തനത്തിലും.
  • 00:43:45 - ഗ്ലൂക്കോറഫാനിനിൽ നിന്ന് സൾഫോറാഫേനിന്റെ ഗട്ട് ബാക്ടീരിയ പരിവർത്തനം.
  • 00:44:24 - പച്ചക്കറികളിൽ നിന്നുള്ള സജീവമായ മൈറോസിനേസുമായി സംയോജിപ്പിക്കുമ്പോൾ സപ്ലിമെന്റുകൾ നന്നായി പ്രവർത്തിക്കുന്നു.
  • 00:44:56 - പാചക വിദ്യകളും ക്രൂസിഫറസ് പച്ചക്കറികളും.
  • 00:46:06 - ഐസോത്തിയോസയനേറ്റ്സ് ഗോയിട്രോജൻ ആയി.

കടപ്പാടുകൾ

Sciencedirect.com/science/article/pii/S2213231716302750

എങ്ങനെയാണ് സൾഫോറഫെയ്ൻ ഉത്പാദിപ്പിക്കുന്നത്?

ചൂടാക്കൽ എപ്പിത്തിയോസ്‌പെസിഫയർ പ്രോട്ടീൻ പ്രവർത്തനം കുറയ്ക്കുകയും ബ്രോക്കോളിയിൽ സൾഫോറഫെയ്ൻ രൂപീകരണം വർദ്ധിപ്പിക്കുകയും ചെയ്യുന്നു

വേര്പെട്ടുനില്ക്കുന്ന

ബ്രോക്കോളിയിൽ നിന്നുള്ള ഐസോത്തിയോസയനേറ്റായ സൾഫോറഫെയ്ൻ ഭക്ഷണത്തിൽ നിന്ന് ലഭിക്കുന്ന ഏറ്റവും ശക്തമായ ആന്റികാർസിനോജനുകളിൽ ഒന്നാണ്. ഈ സംയുക്തം കേടുകൂടാതെയിരിക്കുന്ന പച്ചക്കറിയിൽ ഇല്ല, പകരം, ബ്രൊക്കോളി ടിഷ്യു ചതയ്ക്കുകയോ ചവയ്ക്കുകയോ ചെയ്യുമ്പോൾ മൈറോസിനേസ് എന്ന തയോഗ്ലൂക്കോസിഡേസ് എൻസൈമിന്റെ പ്രവർത്തനത്താൽ അതിന്റെ ഗ്ലൂക്കോസിനോലേറ്റ് മുൻഗാമിയായ ഗ്ലൂക്കോറഫാനിനിൽ നിന്നാണ് ഇത് രൂപം കൊള്ളുന്നത്. എന്നിരുന്നാലും, ഗ്ലൂക്കോറഫാനിനിൽ നിന്നുള്ള സൾഫോറാഫേൻ വിളവ് കുറവാണെന്നും, സസ്യകോശങ്ങളെ മുറിയിലെ ഊഷ്മാവിൽ ചതച്ചുകളയുമ്പോൾ, ബയോആക്ടീവ് അല്ലാത്ത നൈട്രൈൽ അനലോഗ്, സൾഫോറാഫെയ്ൻ നൈട്രൈൽ, പ്രാഥമിക ജലവിശ്ലേഷണ ഉൽപ്പന്നമാണെന്നും നിരവധി പഠനങ്ങൾ തെളിയിച്ചിട്ടുണ്ട്. അറബിഡോപ്‌സിസിൽ, ഗ്ലൂക്കോസിനോലേറ്റുകളിൽ നിന്നുള്ള നൈട്രൈൽ രൂപീകരണം നിയന്ത്രിക്കുന്നത് ഹീറ്റ് സെൻസിറ്റീവ് പ്രോട്ടീൻ, എപ്പിത്തിയോസ്‌പെസിഫയർ പ്രോട്ടീൻ (ഇഎസ്‌പി), മൈറോസിനേസിന്റെ നോൺ-കാറ്റലിറ്റിക് കോഫാക്ടർ ആണെന്നാണ് സമീപകാല തെളിവുകൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നത്. ബ്രോക്കോളി പൂക്കളും മുളകളും ചൂടാക്കി സൾഫോറഫേൻ, സൾഫോറാഫെയ്ൻ നൈട്രൈൽ രൂപീകരണത്തിൽ വരുത്തുന്ന ഫലങ്ങൾ പരിശോധിക്കുക, ബ്രോക്കോളിയിൽ ഇഎസ്പി പ്രവർത്തനം ഉണ്ടോ എന്ന് നിർണ്ണയിക്കുക, തുടർന്ന് ഇഎസ്പി പ്രവർത്തനം, സൾഫോറഫെയ്ൻ ഉള്ളടക്കം, ബയോ ആക്ടിവിറ്റി എന്നിവയിലെ താപത്തെ ആശ്രയിച്ചുള്ള മാറ്റങ്ങൾ പരസ്പരം ബന്ധിപ്പിക്കുക എന്നതായിരുന്നു ഞങ്ങളുടെ ലക്ഷ്യങ്ങൾ. സെൽ കൾച്ചറിലെ രണ്ടാം ഘട്ട ഡിടോക്സിഫിക്കേഷൻ എൻസൈം ക്വിനോൺ റിഡക്റ്റേസ് (ക്യുആർ). പുതിയ ബ്രൊക്കോളി പൂക്കളോ ബ്രൊക്കോളി മുളകളോ ഹോമോജനൈസേഷന് മുമ്പ് 60 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ ചൂടാക്കുന്നത് ഒരേസമയം സൾഫോറഫേൻ രൂപീകരണം വർദ്ധിപ്പിക്കുകയും സൾഫോറഫേൻ നൈട്രൈൽ രൂപീകരണം കുറയുകയും ചെയ്യുന്നു. ഇഎസ്പി പ്രവർത്തനത്തിന്റെ ഗണ്യമായ നഷ്ടം സൾഫോറഫെയ്ൻ നൈട്രൈൽ രൂപീകരണത്തിലെ കുറവിന് സമാന്തരമായി. 70 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിലും അതിനുമുകളിലും ചൂടാക്കുന്നത് ബ്രോക്കോളി പൂക്കളിൽ രണ്ട് ഉൽപ്പന്നങ്ങളുടെയും രൂപീകരണം കുറയ്ക്കുന്നു, പക്ഷേ ബ്രോക്കോളി മുളകളിൽ അല്ല. സംസ്ക്കരിച്ച മൗസ് ഹെപ്പറ്റോമ Hepa lclc7 സെല്ലുകളിൽ QR-ന്റെ ഇൻഡക്ഷൻ സമാന്തരമായി സൾഫോറാഫെയ്ൻ രൂപീകരണത്തിൽ വർദ്ധിക്കുന്നു.

 

ബ്രൊക്കോളി പൂക്കളും മുളകളും 60 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസ് വരെ ചൂടാക്കുന്നതിന് മുമ്പ്, ചതച്ചതിന് ശേഷം പച്ചക്കറി ടിഷ്യൂ സത്തിൽ സൾഫോറാഫെയ്ൻ (എസ്എഫ്) മൈറോസിനേസ്-കാറ്റലൈസ്ഡ് രൂപീകരണം ഗണ്യമായി വർദ്ധിപ്പിച്ചു. ഇത് സൾഫോറഫേൻ നൈട്രൈൽ (എസ്എഫ് നൈട്രൈൽ) രൂപീകരണത്തിലും എപ്പിത്തിയോസ്പെസിഫയർ പ്രോട്ടീൻ (ഇഎസ്പി) പ്രവർത്തനത്തിലും കുറവുമായി ബന്ധപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു.

അടയാളവാക്കുകൾ: ബ്രോക്കോളി, ബ്രാസിക്ക ഒലറേസിയ, ക്രൂസിഫെറ, കാൻസർ, ആന്റികാർസിനോജൻ, സൾഫോറഫെയ്ൻ, സൾഫോറഫെയ്ൻ നൈട്രൈൽ, എപ്പിത്തിയോസ്പെസിഫയർ പ്രോട്ടീൻ, ക്വിനോൺ റിഡക്റ്റേസ്

ഉപസംഹാരമായി, ബ്രോക്കോളിയിലും മറ്റ് ക്രൂസിഫറസ് പച്ചക്കറികളിലും കാണപ്പെടുന്ന ഒരു ഫൈറ്റോകെമിക്കൽ ആണ് സൾഫോറഫേൻ. ആന്തരികവും ബാഹ്യവുമായ ഘടകങ്ങൾ മൂലമുണ്ടാകുന്ന അനിയന്ത്രിതമായ അളവിലുള്ള ഓക്സിഡൻറുകൾ മനുഷ്യശരീരത്തിൽ ഓക്സിഡേറ്റീവ് സമ്മർദ്ദത്തിന് കാരണമാകും, ഇത് ആത്യന്തികമായി പലതരം ആരോഗ്യപ്രശ്നങ്ങളിലേക്ക് നയിച്ചേക്കാം. ഓക്‌സിഡന്റുകളോടുള്ള സെല്ലിന്റെ പ്രതികരണത്തെ നിയന്ത്രിക്കുന്ന സംരക്ഷിത ആന്റിഓക്‌സിഡന്റ് സംവിധാനങ്ങളെ നിയന്ത്രിക്കാൻ സഹായിക്കുന്ന ട്രാൻസ്‌ക്രിപ്ഷൻ ഘടകമായ Nrf2 ന്റെ ഉത്പാദനം സൾഫോറാഫേനിന് സജീവമാക്കാൻ കഴിയും. ഞങ്ങളുടെ വിവരങ്ങളുടെ വ്യാപ്തി കൈറോപ്രാക്‌റ്റിക്, നട്ടെല്ല് ആരോഗ്യ പ്രശ്‌നങ്ങളിൽ മാത്രമായി പരിമിതപ്പെടുത്തിയിരിക്കുന്നു. വിഷയം ചർച്ച ചെയ്യാൻ, ഡോ. ജിമെനെസിനോട് ചോദിക്കാൻ മടിക്കേണ്ടതില്ല അല്ലെങ്കിൽ ഞങ്ങളെ ബന്ധപ്പെടുക915-850-0900 .

ഡോ. അലക്സ് ജിമെനെസ് ക്യൂറേറ്റ് ചെയ്തത്

ഇതിൽ നിന്ന് പരാമർശിച്ചത്: Sciencedirect.com

ഗ്രീൻ കോൾ നൗ ബട്ടൺ H .png

അധിക വിഷയ ചർച്ച: കടുത്ത നടുവേദന

പുറം വേദനലോകമെമ്പാടുമുള്ള വൈകല്യത്തിനും ജോലിസ്ഥലത്ത് ദിവസങ്ങൾ നഷ്ടപ്പെടുന്നതിനുമുള്ള ഏറ്റവും സാധാരണമായ കാരണങ്ങളിലൊന്നാണ്. ഡോക്ടർ ഓഫീസ് സന്ദർശനത്തിനുള്ള ഏറ്റവും സാധാരണമായ രണ്ടാമത്തെ കാരണം നടുവേദനയെ ആട്രിബ്യൂട്ട് ചെയ്യുന്നു, ഇത് അപ്പർ-റെസ്പിറേറ്ററി അണുബാധകളെക്കാൾ കൂടുതലാണ്. ജനസംഖ്യയുടെ ഏകദേശം 80 ശതമാനം പേർക്കും ജീവിതത്തിലുടനീളം ഒരിക്കലെങ്കിലും നടുവേദന അനുഭവപ്പെടും. നട്ടെല്ല് മറ്റ് മൃദുവായ ടിഷ്യൂകൾക്കിടയിൽ അസ്ഥികൾ, സന്ധികൾ, അസ്ഥിബന്ധങ്ങൾ, പേശികൾ എന്നിവയാൽ നിർമ്മിതമായ ഒരു സങ്കീർണ്ണ ഘടനയാണ്. ഇക്കാരണത്താൽ, പരിക്കുകൾ കൂടാതെ/അല്ലെങ്കിൽ വഷളായ അവസ്ഥകൾഹാർനിയേറ്റഡ് ഡിസ്ക്കുകൾ, ഒടുവിൽ നടുവേദനയുടെ ലക്ഷണങ്ങളിലേക്ക് നയിച്ചേക്കാം. സ്‌പോർട്‌സ് പരിക്കുകൾ അല്ലെങ്കിൽ വാഹനാപകട പരിക്കുകൾ പലപ്പോഴും നടുവേദനയുടെ ഏറ്റവും സാധാരണമായ കാരണമാണ്, എന്നിരുന്നാലും, ചിലപ്പോൾ ഏറ്റവും ലളിതമായ ചലനങ്ങൾക്ക് വേദനാജനകമായ ഫലങ്ങൾ ഉണ്ടാകാം. ഭാഗ്യവശാൽ, കൈറോപ്രാക്റ്റിക് കെയർ പോലുള്ള ഇതര ചികിത്സാ ഓപ്ഷനുകൾ, നട്ടെല്ല് ക്രമീകരണങ്ങളുടെയും മാനുവൽ കൃത്രിമത്വങ്ങളുടെയും ഉപയോഗത്തിലൂടെ നടുവേദന കുറയ്ക്കാൻ സഹായിക്കും, ആത്യന്തികമായി വേദന ആശ്വാസം മെച്ചപ്പെടുത്തുന്നു.

കാർട്ടൂൺ പേപ്പർ ബോയിയുടെ ബ്ലോഗ് ചിത്രം

എക്സ്ട്രാ എക്സ്ട്രാ | പ്രധാന വിഷയം: ശുപാർശ ചെയ്യുന്ന എൽ പാസോ, ടിഎക്സ് കൈറോപ്രാക്റ്റർ

***

പരിശീലനത്തിന്റെ പ്രൊഫഷണൽ വ്യാപ്തി *

ഇവിടെയുള്ള വിവരങ്ങൾ "എന്താണ് സൾഫോറഫെയ്ൻ?"യോഗ്യതയുള്ള ആരോഗ്യപരിചരണ പ്രൊഫഷണലോ ലൈസൻസുള്ള ഫിസിഷ്യനോടോ ഉള്ള ബന്ധം മാറ്റിസ്ഥാപിക്കാൻ ഉദ്ദേശിച്ചുള്ളതല്ല, അത് മെഡിക്കൽ ഉപദേശമല്ല. യോഗ്യതയുള്ള ഒരു ഹെൽത്ത് കെയർ പ്രൊഫഷണലുമായുള്ള നിങ്ങളുടെ ഗവേഷണത്തിന്റെയും പങ്കാളിത്തത്തിന്റെയും അടിസ്ഥാനത്തിൽ ആരോഗ്യ സംരക്ഷണ തീരുമാനങ്ങൾ എടുക്കാൻ ഞങ്ങൾ നിങ്ങളെ പ്രോത്സാഹിപ്പിക്കുന്നു.

ബ്ലോഗ് വിവരങ്ങളും സ്കോപ്പ് ചർച്ചകളും

ഞങ്ങളുടെ വിവര വ്യാപ്തി കൈറോപ്രാക്‌റ്റിക്, മസ്‌കുലോസ്‌കെലെറ്റൽ, ഫിസിക്കൽ മെഡിസിൻ, വെൽനസ്, സംഭാവന എറ്റിയോളജിക്കൽ എന്നിവയിൽ പരിമിതപ്പെടുത്തിയിരിക്കുന്നു വിസെറോസോമാറ്റിക് അസ്വസ്ഥതകൾ ക്ലിനിക്കൽ അവതരണങ്ങൾക്കുള്ളിൽ, അനുബന്ധ സോമാറ്റോവിസെറൽ റിഫ്ലെക്സ് ക്ലിനിക്കൽ ഡൈനാമിക്സ്, സബ്ലക്സേഷൻ കോംപ്ലക്സുകൾ, സെൻസിറ്റീവ് ആരോഗ്യ പ്രശ്നങ്ങൾ, കൂടാതെ/അല്ലെങ്കിൽ ഫങ്ഷണൽ മെഡിസിൻ ലേഖനങ്ങൾ, വിഷയങ്ങൾ, ചർച്ചകൾ.

ഞങ്ങൾ നൽകുകയും അവതരിപ്പിക്കുകയും ചെയ്യുന്നു ക്ലിനിക്കൽ സഹകരണം വിവിധ വിഷയങ്ങളിൽ നിന്നുള്ള വിദഗ്ധരുമായി. ഓരോ സ്പെഷ്യലിസ്റ്റും അവരുടെ പ്രൊഫഷണൽ പരിശീലന പരിധിയും ലൈസൻസിന്റെ അധികാരപരിധിയുമാണ് നിയന്ത്രിക്കുന്നത്. മസ്‌കുലോസ്‌കെലെറ്റൽ സിസ്റ്റത്തിന്റെ പരിക്കുകൾക്കോ ​​തകരാറുകൾക്കോ ​​വേണ്ടിയുള്ള പരിചരണത്തിനും പിന്തുണയ്‌ക്കും ഞങ്ങൾ ഫങ്ഷണൽ ഹെൽത്ത് & വെൽനസ് പ്രോട്ടോക്കോളുകൾ ഉപയോഗിക്കുന്നു.

ഞങ്ങളുടെ വീഡിയോകൾ, പോസ്റ്റുകൾ, വിഷയങ്ങൾ, വിഷയങ്ങൾ, സ്ഥിതിവിവരക്കണക്കുകൾ എന്നിവയുമായി ബന്ധപ്പെട്ടതും നേരിട്ടോ അല്ലാതെയോ ഞങ്ങളുടെ ക്ലിനിക്കൽ പ്രാക്ടീസ് സ്കോപ്പിനെ പിന്തുണയ്ക്കുന്ന ക്ലിനിക്കൽ വിഷയങ്ങൾ, പ്രശ്നങ്ങൾ, വിഷയങ്ങൾ എന്നിവ ഉൾക്കൊള്ളുന്നു.*

ഞങ്ങളുടെ ഓഫീസ് ന്യായമായും പിന്തുണാ ഉദ്ധരണികൾ നൽകാൻ ശ്രമിക്കുകയും ഞങ്ങളുടെ പോസ്റ്റുകളെ പിന്തുണയ്ക്കുന്ന പ്രസക്തമായ ഗവേഷണ പഠനമോ പഠനങ്ങളോ തിരിച്ചറിയുകയും ചെയ്തിട്ടുണ്ട്. റെഗുലേറ്ററി ബോർഡുകൾക്കും പൊതുജനങ്ങൾക്കും അഭ്യർത്ഥന പ്രകാരം ലഭ്യമായ ഗവേഷണ പഠനങ്ങളുടെ പകർപ്പുകൾ ഞങ്ങൾ നൽകുന്നു.

ഒരു പ്രത്യേക പരിചരണ പദ്ധതിയിലോ ചികിത്സാ പ്രോട്ടോക്കോളിലോ ഇത് എങ്ങനെ സഹായിക്കുമെന്നതിന്റെ അധിക വിശദീകരണം ആവശ്യമായ കാര്യങ്ങൾ ഞങ്ങൾ ഉൾക്കൊള്ളുന്നുവെന്ന് ഞങ്ങൾ മനസ്സിലാക്കുന്നു; അതിനാൽ, മുകളിലുള്ള വിഷയം കൂടുതൽ ചർച്ച ചെയ്യാൻ, ദയവായി ചോദിക്കാൻ മടിക്കേണ്ടതില്ല ഡോ. അലക്സ് ജിമെനെസ്, ഡിസി, അല്ലെങ്കിൽ ഞങ്ങളെ ബന്ധപ്പെടുക 915-850-0900.

നിങ്ങളെയും നിങ്ങളുടെ കുടുംബത്തെയും സഹായിക്കാൻ ഞങ്ങൾ ഇവിടെയുണ്ട്.

അനുഗ്രഹങ്ങൾ

ഡോ. അലക്സ് ജിമെനെസ് ഡിസി, എംഎസ്എസിപി, RN*, സി.സി.എസ്.ടി., ഐഎഫ്എംസിപി*, സി.ഐ.എഫ്.എം*, ATN*

ഇമെയിൽ: coach@elpasofunctionalmedicine.com

ലെ ഡോക്ടർ ഓഫ് ചിറോപ്രാക്‌റ്റിക് (ഡിസി) ആയി ലൈസൻസ് ചെയ്‌തു ടെക്സസ് & ന്യൂ മെക്സിക്കോ*
ടെക്സസ് ഡിസി ലൈസൻസ് # TX5807, ന്യൂ മെക്സിക്കോ DC ലൈസൻസ് # NM-DC2182

രജിസ്റ്റർ ചെയ്ത നഴ്‌സായി ലൈസൻസ് (RN*) in ഫ്ലോറിഡ
ഫ്ലോറിഡ ലൈസൻസ് RN ലൈസൻസ് # RN9617241 (നിയന്ത്രണ നമ്പർ. 3558029)
ഒതുക്കമുള്ള നില: മൾട്ടി-സ്റ്റേറ്റ് ലൈസൻസ്: പ്രാക്ടീസ് ചെയ്യാൻ അനുമതിയുണ്ട് 40 സംസ്ഥാനങ്ങൾ*

ഡോ. അലക്സ് ജിമെനെസ് DC, MSACP, RN* CIFM*, IFMCP*, ATN*, CCST
എന്റെ ഡിജിറ്റൽ ബിസിനസ് കാർഡ്